牛焦蟲病抗體（PIR-Ab）ELISA檢測試劑盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被焦蟲病抗原的微孔中,，依次加入標本、HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并徹-底洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成最終的黃色,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較,，從而判定標本中焦蟲病抗體（PIR-Ab）的存在與否,。

試劑盒組成

名稱96孔配置48孔配置備注

微孔酶標板12孔×8條12孔×4條無

陰性對照0.5mL 0.5mL 無

陽性對照0.5mL 0.5mL 無

檢測抗體-HRP10mL5mL無

20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋

樣本-稀釋液6mL3mL無

底物A6mL3mL無

底物B6mL3mL無

終止液12mL6mL無

封板膜2張2張無

說明書1份1份無

自封袋1個1個無

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設置陰,、陽性對照孔和樣本孔，陰,、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照各50μL；

3.  待測樣本孔加待測樣本50μL,；

4.  隨后陰,、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果,。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

4．請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存,。

7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

9．牛焦蟲病抗體（PIR-Ab）ELISA檢測試劑盒不同批號組分不得混用,。