大鼠阻抑素(PHB)ELISA試劑盒

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿、組織,、細胞上清及相關(guān)液體樣本中大鼠阻抑素的含量,。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

樣本處理及要求

1. 血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過一夜后于1000g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑,，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

3.  組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果）,，稱重后將組織,剪碎,。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨,。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎,，或反復(fù)凍融,。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測,。

4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘,，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
注：標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測,。

標(biāo)本處理

1.  本公司只對試劑盒本身負責(zé),，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責(zé)，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,，預(yù)留充足的樣本,。

2.  實驗前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量，如果標(biāo)本濃度過高,，應(yīng)對標(biāo)本進行稀釋,，使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍,，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2),。

3.  若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,，建議進行預(yù)實驗驗證其有效性，并注意留存樣本,。

4.  使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實驗結(jié)果偏差,。

5.  若樣本為細胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多,，如：細胞狀態(tài),、細胞數(shù)量、采樣時間等,，所以可能存在檢測不出的情況,。

6.  某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白,，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,，而不被檢測出。

7.  建議使用新鮮樣本,，保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實驗結(jié)果偏差。

需要而未提供的試劑和器材

• 酶標(biāo)儀（450nm）

• 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL

• 37℃恒溫箱

• 蒸餾水或去離子水

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；

3.  樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加。

4.  除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）,。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

實驗結(jié)果計算

以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，并得到直線回歸方程,，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度,。

大鼠阻抑素(PHB)ELISA試劑盒

1. 檢測范圍：15 pg/mL – 480 pg/mL,。

2.  靈敏度：zui低檢測濃度小于1.0 pg/mL。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。

4.  重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,，板間變異系數(shù)小于15% 。

說明

1.  由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析,，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險,。

2.  zui終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實驗環(huán)境密切相關(guān),，請務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份,。

3.  不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如：檢測限,、靈敏度以及顯色時間等,，請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作，電子版說明書僅作參考,。

4.  只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,，不能混用其他商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到的檢測結(jié)果,。

問題解答

若實驗效果不好,，請及時對顯色結(jié)果拍照，保留所用板條及未使用試劑,，并妥善保存,，然后我公司為您解決問題。同時您也可以參考以下資料：