小鼠小腸隱窩上皮原代細胞

小鼠小腸隱窩上皮細胞分離自小腸組織,；小腸位于腹中,，上端接幽門與胃相通，下端通過闌門與大腸相連,，是食物消化吸收的主要場所,。小腸盤曲于腹腔內，上連胃幽門,，下接盲腸,，分為十二指腸、空腸和回腸三部分,。小腸內消化是至關重要的,，因為食物經(jīng)過小腸內胰液、膽汁和小腸液的化學性消化及小腸運動的機械性消化后,，基本上完成了消化過程，同時營養(yǎng)物質被小腸粘膜吸收了,。小腸管壁由粘膜,、粘膜下層、肌層和漿膜構成,。其結構特點是管壁有環(huán)形皺襞,，粘膜有許多絨毛，絨毛根部的上皮下陷至固有層,，形成管狀的腸腺,，其開口位于絨毛根部之間。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關系密切,；構成腸腺的細胞有柱狀細胞,、杯狀細胞,、潘氏細胞和未分化細胞。柱狀細胞和內分泌細胞與絨毛上皮相似,，接近絨毛的柱狀細胞與吸收細胞相似,，絨毛深部的柱狀細胞微絨毛少而短，不形成紋狀緣,。小腸有三種功能即消化,、吸收和分泌及運動功能，其中以吸收和分泌功能為主,。小腸腔面的環(huán)行皺襞從幽門附近開始出現(xiàn),，在十二指腸末段和空腸頭段極發(fā)達，向下逐漸減少和變矮,，至腸中段以下基本消失,。粘膜表面還有許多細小的腸絨毛，是由上皮和固有層向腸腔突起而成,，形狀不一,，以十二指腸和空腸頭段發(fā)達。絨毛于十二指腸呈葉狀,，于空腸呈指狀,，于回腸則細而短。環(huán)行皺襞和絨毛使小腸表面積擴大20-30倍,，絨毛根部的上皮下隱至固有層形成管狀的小腸腺,，又稱腸隱窩，故小腸腺與絨毛的上皮是連續(xù)的,，小腸腺直接開口于腸腔,。

產(chǎn)品名稱：小鼠小腸隱窩上皮細胞

組織來源：小腸組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

方法簡介

公司實驗室分離的小鼠小腸隱窩上皮采用先機械分離法、后膠原酶消化法并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠小腸隱窩上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。