WAKO測序級天冬氨酰蛋白內(nèi)切酶Asp-N

WAKO測序級天冬氨酰蛋白內(nèi)切酶Asp-N

人類蛋白質(zhì)組圖譜為超過90%的蛋白質(zhì)編碼基因提供了其蛋白質(zhì)翻譯證據(jù),，而由于選擇性剪接事件的存在，人類基因組約20,000個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因中的蛋白質(zhì)組多樣性顯著增加,。因此,，精確檢測蛋白質(zhì)多樣性對于理解生物學(xué)功能至關(guān)重要。但由于目前蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的局限性,，常用的蛋白質(zhì)組學(xué)檢測方法是通過部分肽段序列來確定整個(gè)蛋白質(zhì)的,，其序列覆蓋率不足以表征樣本中存在的所有蛋白質(zhì)狀態(tài),。

◆實(shí)驗(yàn)概況

研究人員使用6種不同的蛋白酶（Trypsin、LysC,、LysN,、GluC、AspN,、Chymotrypsin,，其中前5種蛋白酶FUJIFILM Wako均可提供）消化6種人類細(xì)胞系蛋白質(zhì)，碎片化后進(jìn)行液相色譜分離和串聯(lián)質(zhì)譜分析,。從17,717個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因或蛋白質(zhì)組中識別100萬條特異性肽段,，其序列覆蓋度中位數(shù)達(dá)到80%，大大提高了某法蛋白質(zhì)組學(xué)對單個(gè)蛋白的序列覆蓋率,，為全面繪制蛋白質(zhì)多樣性圖譜奠定了基礎(chǔ),。

◆實(shí)驗(yàn)結(jié)果

高蛋白質(zhì)組序列覆蓋度有助于更全面地檢測

不同可變檢測事件產(chǎn)生的蛋白isoform。依據(jù)RNA-Seq的數(shù)據(jù),，人體各器官和細(xì)胞系提供了超過95%的外顯子可變剪接的基因產(chǎn)物,。但由于質(zhì)譜數(shù)據(jù)的覆蓋度不足，導(dǎo)致編碼出來的蛋白質(zhì)與可變剪接轉(zhuǎn)錄本的數(shù)量不成正比,。

從下圖可以看到每種酶單獨(dú)使用時(shí),，都會產(chǎn)生明顯較低的檢測水平（圖1）。但是非某氨酸和非賴氨酸特異性的蛋白酶（GluC和AspN）與某蛋白酶聯(lián)合使用的時(shí)候,，可以提高剪接位點(diǎn)的覆蓋度（圖2）,。