雙縮脲法蛋白質(zhì)含量測定試劑盒說明書

微量法 100T/96S

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定，確保蛋白濃度在 1～10mg/ml 范圍內(nèi),。

測定意義：

樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計算,。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析,。

測定原理：

強堿性溶液中,，雙縮脲與 CuSO4 形成紫色絡合物；紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比,，而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無關,，故可用來測定蛋白質(zhì)含量。該方法測定范圍為 1~10mg 蛋白質(zhì),，適用于蛋白質(zhì)濃度高的樣品,，尤其是動物材料。

雙縮脲法蛋白質(zhì)含量測定試劑盒-常備現(xiàn)貨

組成：

標準品：液體 1ml×1 瓶,，5 mg/ml,，4℃保存。

自備儀器和用品：

離心機,、可見分光光度計/酶標儀,、微量石英比色皿/96 孔板、移液器和蒸餾水,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取提?。?/span>

1、液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定,。

2,、組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml提取液（自備,，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水））

冰浴勻漿,，8000g，4℃離心 10min,，取上清,，即待測液。（動物樣品常常需要稀釋）

3 ,、細菌,、真菌：按照細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w,，超聲 3 秒,，間隔 7 秒,，總時間 3min）；然后 8000g,，

4℃,，離心 10min,，取上清置于冰上待測,。

測定操作：

1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 540 nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2. 空白管：取 0.5mL EP 管，加入 40μl 蒸餾水,，200μl 試劑一,，混勻后室溫靜置 15 min，取 200μl 于微量玻璃比色皿/96 孔板,，540nm 比色,，記為A 空白管。

3. 標準管：取 0.5mL EP 管,，加入 40μl 標準液,，200μl 試劑一，混勻后室溫靜置 15 min,，取 200μl 于微量玻璃比色皿/96 孔板,，540 nm 比色，記為 A 標準管,。

4. 測定管：取 0.5mL EP 管,，加入 40μl 待測液，200μl 試劑一,，混勻后室溫靜置 15 min,，取 200μl 于微量玻璃比色皿/96 孔板，540nm 比色,，記為A 測定管,。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

樣品中蛋白質(zhì)濃度計算公式:

C 待測（mg/ml）= C 標準管×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)

=5×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)

注意事項:

1. 樣品蛋白濃度須在 1～10mg/ml 范圍內(nèi),，低于 1mg/ml 不能用此法,，高于 10mg/ml 須做相應稀釋。因此測定前用 1～2 個樣做預實驗,，確保蛋白濃度在 1～10mg/ml 范圍內(nèi),。

2. 待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、雙蒸水或不含蛋白的 PBS 提取,。該法受硫酸銨,、Tris 緩沖液干擾,，提取液中應不含這些物質(zhì)；否則改用BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒,。

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