BU6002 果糖-1,6-二磷酸酶試劑盒 果膠系列
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 BU6002
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2025/5/5 8:46:51
- 訪問次數(shù) 52
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | BU6002 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BU6002 | 應用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 在糖的異生代謝和光合作用同化物蔗糖的合成中起關(guān)鍵性的作用,。 |
果糖-1,6-二磷酸酶(Fructose 1,6-bisphosphatase,，FBP)試劑盒說明書
微量法 100 管/96 樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：
果糖-1,6 二磷酸酶又稱果糖 1,6 二磷酸酯酶，催化 1,6 二磷酸果糖和水生成 6 磷酸果糖和無機磷,，在糖的異生代謝和光合作用同化物蔗糖的合成中起關(guān)鍵性的作用,。
測定原理：
FBP 催化 1,6 二磷酸果糖和水生成 6 磷酸果糖和無機磷，在反應體系中添加的磷酸葡萄糖異構(gòu)酶和 6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成 6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH,，340nm 下測定NADPH 增加速率,，即可計算 FBP 活性。
果糖-1,6-二磷酸酶試劑盒 果膠系列
組成：
產(chǎn)品名稱 | BU6002-100T/96S | Storage |
提取液：液體 | 100ml | 4℃ |
提取液：液體 | 100ml | 4℃ |
試劑一：粉劑 | 1 瓶 | -20℃ |
試劑二：液體 | 7.2μl | 4℃ |
試劑三：粉劑 | 1 瓶 | -20℃ |
試劑四：液體 | 25ml | 4℃ |
說明書 | 一份 | |
試劑一：粉劑×1 瓶,，-20℃保存,；臨用前加入 20ml 試劑四充分溶解待用，用不完的試劑 4℃保存,； 試劑二：液體 7.2μl×1 支,，4℃保存；臨用前加入 1ml 蒸餾水充分溶解待用,，用不完的試劑 4℃保存,；試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存,；臨用前加入 1ml 蒸餾水充分溶解待用,，用不完的試劑 4℃保存；
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準
自備儀器和用品：
分光光度計/酶標儀,、恒溫水浴鍋,、臺式離心機、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96 孔板,、研缽、冰和蒸餾水,。
樣本的前處理
①總FBP 酶提?。航ㄗh稱取約 0.1g 樣本，加入 1ml 提取液一,，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴,，200W，破碎3s,，間歇 7s,，總時間 1min），然后 4℃,，8000g 離心 10min,，取上清測定。
②胞漿和葉綠體FBP 酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5～10 的比例（建議稱取約 0.1g 樣本,，加入 1ml 提取液一）,，冰浴勻漿后于 4℃,，200g 離心 5min，棄沉淀,，取上清在 4℃，8000g離心 10min,，取上清用于測定胞漿 FBP 酶活性,，取沉淀加 1ml 提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴,，200W,，破碎 3s，間歇 7s,，總時間 1min）,，然后 4℃，8000g 離心 10min,，取上清測定葉綠體中FBP 酶活性,。
建議測定總FBP 酶活性，按照步驟①提取粗酶液,，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的 FBP,，則按照步驟②提取粗酶液。
測定步驟：
1,、分光光度計預熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零,。
2,、將試劑一、二,、三 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預熱 10 分鐘
3,、加樣表：
試劑名稱(μl) | 測定管 |
樣本 | 20 |
試劑二 | 10 |
試劑三 | 10 |
試劑一 | 160 |
將上述試劑按順序加入微量石英比色皿或 96 孔板中，立即混勻,，加入最后一個試劑的同時開始計時,，在340 nm 波長下記錄反應 1min 后吸光度A1 和反應 6min 后的吸光度A2，計算ΔA=A2-A1,。
FBP 活性計算:
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位,。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g 組織每分鐘生成 1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
FBP（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V 反總：反應體系總體積,，2×10-4 L,；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm,；d：比色皿光徑,， 1cm,；V 樣：加入樣本體積，0.02 ml,；V 樣總：加入提取液體積,，1 ml；T：反應時間,，5 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml,；W：樣本質(zhì)量,，g。
b. 用 96 孔板測定的計算公式如下
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位,。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g 組織每分鐘生成 1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位,。
FBP（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=643×ΔA÷W
V 反總：反應體系總體積，2×10-4 L,；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù),，6.22×103 L / mol /cm；d：96 孔板光徑,， 0.5cm,；V 樣：加入樣本體積，0.02ml,；V 樣總：加入提取液體積,，1 ml；T：反應時間,，5 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml,；W：樣本質(zhì)量,，g。
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