雙縮脲法蛋白質(zhì)含量測定試劑盒說明書

分光光度法 50T/48S

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定,，確保蛋白濃度在 1～10mg/ml 范圍內(nèi)。

測定意義：

樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計算,。此外,，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。

測定原理：

強堿性溶液中,，雙縮脲與CuSO4 形成紫色絡合物,；紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，而與蛋白質(zhì)分子量及氨ji酸成分無關(guān),，故可用來測定蛋白質(zhì)含量,。該方法測定范圍為 1~10mg 蛋白質(zhì),，適用于蛋白質(zhì)濃度高的樣品，尤其是動物材料

自備儀器和用品：

可見分光光度計,、臺式離心機,、可調(diào)式移液器、1 ml 玻璃比色皿,、研缽,、冰和蒸餾水。

組成：

標準品：液體 1ml×1 瓶,，5 mg/ml,，4℃保存。

樣品中可溶性蛋白質(zhì)提?。?/span>

液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定,。

組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液（自備,，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水）冰浴勻漿,，8000g，4℃離心 10min,，取上清,，即待測液。（動物樣品常常需要稀釋）

細菌,、真菌：按照細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入1ml 提取液）,，冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒,，間隔 7 秒,，總時間 3min）；然后 8000g,，4℃,，離心 10min，取上清置于冰上待測,。

測定步驟：

分光光度計預熱 30 min,，調(diào)節(jié)波長到 540 nm，蒸餾水調(diào)零,。

空白管：取 1 mL 玻璃比色皿,，加入 200μl 蒸餾水，1000μl 試劑一,，混勻后室溫靜置 15 min,，于 540nm 比色，記為 A 空白管,。

標準管：取 1 mL 玻璃比色皿,，加入 200μl 標準液，1000μl 試劑一,，混勻后室溫靜置 15 min,，于 540 nm 比色，記為 A 標準管,。

測定管：取 1 mL 玻璃比色皿,，加入 200μl 待測液，1000μl 試劑一,，混勻后室溫靜置 15 min,，于 540nm 比色，記為 A 測定管,。

注意：空白管和標準管只需測定一次,。

樣品中蛋白質(zhì)濃度計算公式

C 待測（mg/mL）= C 標準管×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)

=5×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)

注意事項：

樣品蛋白濃度須在 1~10mg/ml 范圍內(nèi)，低于 1mg/ml 不能用此法,，高于 10mg/ml 須做相應稀釋,。因此測定前用 1~2 個樣做預實驗，確保蛋白濃度在 1~10mg/ml 范圍內(nèi),。

待測樣品蛋白提取可用生理鹽水,、雙蒸水或不含蛋白的 PBS 提取。該法受硫酸銨,、Tris 緩沖液干擾,，提取液中應不含這些物質(zhì)；否則改用BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒,。

雙縮脲法蛋白質(zhì)含量測定試劑盒