多胺氧化酶（Polyamine oxidase,，PAO）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

多胺氧化酶是催化生物體內多胺氧化的關鍵酶，通過調節(jié)體內多胺水平和生成物的濃度,，參與各種植物體對逆境脅迫的反應和生長發(fā)育過程,。

測定原理：

PAO 催化多胺氧化產生過氧化氫,，在過氧化氫酶存在的條件下與底物顯色，在 550nm 下有特征吸收峰,，通過測定吸光值增加速率來反映 PAO 活性,。

多胺氧化酶試劑盒  抗氧系列-常備現貨

組成：

自備儀器和用品：

分光光度計、臺式離心機,、可調式移液器,、1ml 玻璃比色皿、研缽,、冰和蒸餾水,。

粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入 1ml 試劑一）進行冰浴勻漿,，然后 10000g，4℃離心 20min,，取上清,，置冰上待測。

2. 細菌,、真菌：按照細胞數量（10⁴ 個）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml 試劑一）,，冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒,，間隔 7 秒,，總時間 3min）；然后 10000g,， 4℃,，離心 10min，取上清置于冰上待測,。

3. 血清等液體：直接測定,。

測定步驟：

1、分光光度計預熱 30min 以上,，調節(jié)波長至 550nm,，蒸餾水調零。

2,、樣本測定

PAO 活性計算：

（1） 按樣本蛋白濃度計算：

單位定義：每mg 組織蛋白在每ml 反應體系中每分鐘A550 變化 0.002 為一個酶活力單位,。

PAO（U/mg prot）＝ΔA×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷0.002÷T =166.67×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算：

單位定義：每g 組織在每ml 反應體系中每分鐘 A550 變化 0.002 為一個酶活力單位。

PAO（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.002÷T =166.67×ΔA÷W

（3） 按細菌或細胞密度計算：

單位定義：每 1 萬個細菌或細胞在每 ml 反應體系中每分鐘A550 變化 0.002 為一個酶活力單位。

PAO（U/10⁴ cell）＝ΔA×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷0.002÷T =0.333×ΔA

（4） 按液體體積計算

單位的定義：每ml 液體樣本在每ml 反應體系中每分鐘A550 變化 0.002 為一個酶活力單位,。

PAO（U/ml）=ΔA×V 反總÷V 樣÷0.002÷T =166.67×ΔA

V 反總：反應體系總體積,，1×10^-3 L；V 樣：加入樣本體積,，0.1 ml,；V 樣總：加入提取液體積，1 ml,；T：反應時間,，30 min；Cpr：樣本蛋白質濃度,，mg/ml,；W：樣本質量，g,；500：細菌或細胞總數,，500 萬。

多胺氧化酶試劑盒  抗氧系列-常備現貨