酪an酸解氨酶（Tyrosine ammonilyase,，TAL）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

TAL 廣泛存在于植物和微生物中，是苯an氨酸代謝途徑的關鍵酶之一,。TAL 能夠躍過肉桂酸-4-羥基化酶（C4H）直接將酪an酸轉化為香豆酸,，香豆酸可進一步生成白藜蘆醇、柚皮素等具有抗氧化,、抗衰老作用的苯丙素類天然產物,。

測定原理：

TAL 能夠分解酪an酸產生香豆酸，使反應溶液 333nm 下的吸光度隨反應時間而上升,，根據吸光度的變化率可計算出 TAL 活性,。

酪an氨酸解氨酶試劑盒 抗氧系列-常備現貨

組成：

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存,。臨用前加 5ml 蒸餾水溶解,；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融,。

自備儀器和用品：

紫外分光光度計,、臺式離心機、可調式移液器,、1ml 石英比色皿,、研缽、冰和蒸餾水

粗酶液提?。?/span>

1,、細菌,、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清,；按照細菌或細胞數量（10⁴ 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液）,，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W,，超聲 3s,，間隔 10s，重復 30 次）,；8000g 4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測,。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測,。

2,、血清（漿）果汁等液體樣品：直接檢測。

測定操作表：

1,、分光光度計預熱 30min 以上,，調節(jié)波長至 333nm，蒸餾水調零,。

2,、試劑二的配置：臨用前在試劑二瓶中加入 15ml 試劑一充分溶解待用（用不完的試劑 4℃保存一周，注意現配現用）,，在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上,。

3、在EP 管中依次加入如下試劑

混勻,，10000g4℃離心 5min，取 0.8~1ml 上清至 1ml 石英比色皿,，333nm 下測定吸光值 A 測定與 A 對照,，

ΔA=A 測定-A 對照

TAL 活性計算：

1、血清（漿）或果汁TAL 活性

單位的定義：每分鐘每ml 血清（漿）或果汁在每ml 反應體系中使 333nm 處吸光值變化

0.01 為一個酶活力單位,。

TAL（U/ml）=ΔA×V 反總÷( V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T =17.5×ΔA

2,、組織、細菌或細胞TAL 活性

（1） 按樣本蛋白濃度計算：

單位定義：每分鐘每mg 組織蛋白在每ml 反應體系中使 333nm 處吸光值變化 0.01 為一個酶活力單位。

TAL（U/mg prot）=ΔA×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷0.01÷T =17.5×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度,。

（2） 按樣本鮮重計算：

單位定義：每分鐘每g 組織在每ml 反應體系中使 333nm 處吸光值變化 0.01 為一個酶活力單位。

TAL（U/g 鮮重）=ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T =17.5×ΔA÷W

（3） 按細菌或細胞密度計算：

單位定義：每分鐘每 1 萬個細菌或細胞在每ml 反應體系中使 333nm 處吸光值變化 0.01 為一個酶活力單位,。

TAL（U/10⁴ cell）=ΔA×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T =0.035×ΔA

V 反總：反應體系總體積,，1.05ml；V 樣：加入樣本體積,，0.1ml,；V 樣總：加入提取液體積，1 ml,；T：反應時間,，60 min；Cpr：樣本蛋白質濃度,，mg/ml,；W：樣本質量，g,；500：細胞或細菌總數,，500 萬。

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