幾丁質(zhì)酶（Chitinase）試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法 100 管/48 樣

幾丁質(zhì)酶試劑盒 糖代謝

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

幾丁質(zhì)主要存在于蝦,、蟹、昆蟲(chóng)等甲殼類動(dòng)物的外殼與軟體動(dòng)物的器官(例如烏賊的軟骨),，以及真菌類的細(xì)胞壁中,。而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質(zhì)水解，具有抵御真菌侵染的作用,，成為抗真菌病害的研究熱點(diǎn),。

測(cè)定原理：

幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖，進(jìn)一步與對(duì)二甲氨基苯甲醛產(chǎn)生紅色化合物,，在 585nm處有特征吸收峰,，吸光值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。

組成：

試劑二：液體 5ml×1 瓶,，4℃保存,。（若出現(xiàn)結(jié)晶，可 80℃左右加熱溶解后使用）

自備儀器和用品：

天平,、水浴鍋,、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、微量石英比色皿/96 孔板,、甲苯（土壤樣品專用）和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入 1ml 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 20min,，取上清,，置冰上待測(cè)。

真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml提取液）,，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w,，超聲 3 秒，間隔 7 秒,，總時(shí)間 3min）,；然后 10000g，4℃,，離心 20min,，取上清置于冰上待測(cè)。

培養(yǎng)液：直接測(cè)定,。

測(cè)定操作表：

計(jì)算公式：

用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.3088-0.003，R2=0.9995

計(jì)算公式：

1,、按照樣本重量計(jì)算

酶活性定義：37℃條件下,，每克組織每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活性單位。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h/g 鮮重）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T

=8.096×（ΔA +0.003）÷W

2,、按照蛋白質(zhì)濃度計(jì)算

酶活定義：37℃條件下,，每毫克蛋白每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位。幾丁質(zhì)酶活性（mg/h mg prot）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T

= 8.096×（ΔA +0.003）÷Cpr

3,、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活定義：37℃條件下,，每 104 個(gè)細(xì)胞每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /104 cell）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量)

=8.096×（ΔA +0.003）÷細(xì)胞數(shù)量

4,、按液體體積計(jì)算

酶活定義：37℃條件下,，每毫升培養(yǎng)液每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位,。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /ml）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷V 樣=8.096×（ΔA +0.003）

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1ml,；V 樣：反應(yīng)體系中樣本體積,，0.4ml；V 樣總：加入提取液體積,，1ml,；W：樣本質(zhì)量，g,；Cpr：樣本蛋白濃度,，mg/ml

用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.1544x-0.003，R2=0.9995

計(jì)算公式：

4,、按照樣本重量計(jì)算

酶活性定義：37℃條件下,，每克組織每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活性單位。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h/g 鮮重）=（ΔA+0.003）÷0.1544×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T

=16.192×（ΔA +0.003）÷W

5,、按照蛋白質(zhì)濃度計(jì)算

酶活定義：37℃條件下,，每毫克蛋白每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位。幾丁質(zhì)酶活性（mg/h mg prot）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T

= 16.192×（ΔA +0.003）÷Cpr

6,、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活定義：37℃條件下,，每 104 個(gè)細(xì)胞每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位,。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /104 cell）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量)

=16.192×（ΔA +0.003）÷細(xì)胞數(shù)量

4,、按液體體積計(jì)算

酶活定義：37℃條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生 1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位,。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /ml）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷V 樣=16.192×（ΔA +0.003）

V 反總：反應(yīng)體系總體積,，1ml；V 樣：反應(yīng)體系中樣本體積,，0.4ml,；V 樣總：加入提取液體積，1ml,；W：樣本質(zhì)量,，g；Cpr：樣本蛋白濃度,，mg/ml

注意事項(xiàng)：

1,、反應(yīng)結(jié)束后立即進(jìn)行比色。

2,、試劑四有一定的毒性,，請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施。

幾丁質(zhì)酶試劑盒 糖代謝