大鼠原代肺巨噬細(xì)胞專用培養(yǎng)基

大鼠原代肺巨噬細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化,，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持大鼠原代肺巨噬細(xì)胞優(yōu)良的生長狀態(tài),。

本產(chǎn)品中已包含大鼠原代肺巨噬細(xì)胞生長所需的各種成分,，無需添加任何成分，可直接用于大鼠原代肺巨噬細(xì)胞的培養(yǎng),。

注意事項(xiàng)

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì),，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部,；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸,，立即用自來水沖洗即可,。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基,，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱,；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套后,，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞,，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中,，混勻后,，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，寫上細(xì)胞名稱,、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基,；

6) 離心完成后棄去上清,，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中,，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置,。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí)，可進(jìn)行傳代,。

2) 在生物安全柜內(nèi),，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基,；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后,，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積,，吸棄 PBS,；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min,；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起,，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管,；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無菌的 15ml 離心管,，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）,；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右,，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細(xì)胞脫,。

6) 1000rpm 離心 5min,；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶,，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后,，棄上清,，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶,，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml,；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后,，將培養(yǎng)瓶置于 37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后,，棄上清,，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中,；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中,，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天,，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管,，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(AGER)重組蛋白 Recombinant Advanced Glycosylation End Product Specific Receptor (AGER)

EPCAM Protein Human 重組人 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白

NRP1重組人 Neuropilin-1 / NRP1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/WSN/1933) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

LALBA重組人 LALBA / Alpha-lactalbumin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

大鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GMCSF/CSF2)試劑盒 ,，英文名： GMCSF/CSF2 ELISA Kit

Mouse keratinocyte aocrine factor (KAF) ELISA Kit / amphiregulin (AR) ELISA Kit 小鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)試劑盒/雙調(diào)蛋白(AR)試劑盒

Mousebonemorphogeneticproteins,BMPsELISAKit 小鼠骨形成蛋白(BMPs)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanpaxillin,PaxELISAKit人樁蛋白

同位素[γ32P]ATP激酶標(biāo)記微衛(wèi)星擴(kuò)增試劑盒20次

ELISAKitPIAb-IgG/IgM大鼠0脂酰肌醇抗體IgG/IgM

小鼠轉(zhuǎn)酶試劑盒   小鼠轉(zhuǎn)酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠轉(zhuǎn)酶試劑盒,，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝）,，產(chǎn)品別名：小鼠轉(zhuǎn)酶試劑盒,、小鼠轉(zhuǎn)酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠基轉(zhuǎn)移酶試劑盒   小鼠基轉(zhuǎn)移酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠基轉(zhuǎn)移酶試劑盒,，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠基轉(zhuǎn)移酶試劑盒,、小鼠基轉(zhuǎn)移酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月,。

小鼠表皮生長因子試劑盒   小鼠表皮生長因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠表皮生長因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝）,，產(chǎn)品別名：小鼠表皮生長因子試劑盒、小鼠表皮生長因子eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月,。

小鼠棒狀桿菌試劑盒   小鼠棒狀桿菌試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠棒狀桿菌試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝）,，產(chǎn)品別名：小鼠棒狀桿菌試劑盒,、小鼠棒狀桿菌eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠己糖激酶(HK)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human sorbitol dehydrogenase (SDH) ELISA Kit 人脫氫酶(SDH)試劑盒

HumanDNABindingProtein,DBPELISAKit 人DNA結(jié)合蛋白(DBP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanAi-glucoprotein210,GP210試劑盒人抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物賴羥化酶(lysylhydroxylase)活性比色法定量試劑盒20次

HumanVitaminA,，VAELISAKit人A(VA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

P物質(zhì)抗體

連接粘附分子2抗體

大鼠原代肺巨噬細(xì)胞專用培養(yǎng)基NRP1重組人 Neuropilin-1 / NRP1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(AGER)重組蛋白 Recombinant Advanced Glycosylation End Product Specific Receptor (AGER)

LALBA重組人 LALBA / Alpha-lactalbumin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

EPCAM Protein Human 重組人 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白

HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/WSN/1933) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

?無菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進(jìn)行,，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱,。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服,、鞋套，戴口罩,、手套,。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌,，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品,。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清,、緩沖液等試劑應(yīng)無菌,、無污染，使用前需進(jìn)行無菌檢測,。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異,，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃,，偏差應(yīng)控制在±0.5℃,。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量,，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定,。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化,。

?定期檢測?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體、細(xì)菌,、真菌等污染檢測,。