產(chǎn)品簡介：

豬傳染性胃腸炎（TGEV）、豬流行性腹瀉（PEDV）及豬 A 組輪狀病毒（PRV）感染,，是豬場常見的病毒性腹瀉,，此三種病毒性腹瀉造成了豬場飼料報酬降低,、藥物和人力增加等重大損失，是危害豬場最嚴(yán)重的   疾病之一,。三者均為高度接觸性腸道疾病,，具有相似的臨床表現(xiàn)及傳染途徑,，其鑒別診斷通常需要借助實驗   室診斷技術(shù),。PCR 技術(shù)具有特異性強，敏感度高,，可進行活體診斷等特點,，在實驗室診斷中具有較突出的優(yōu)勢。本試劑盒適用于檢測標(biāo)本中的豬傳染性胃腸炎,、豬流行性腹瀉病毒和豬 A 組輪狀病毒,，適用于豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉病毒,、豬 A 組輪狀病毒感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查,。

產(chǎn)品特點：

一、嚴(yán)格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制,，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量,，讓您的檢測結(jié)果更可信。

二,、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化,，具有出色的靈敏度，能夠檢測到極微量的豬傳染性胃腸炎/豬流行性腹瀉病毒/豬 A 組輪狀病毒核酸,，不放過任何潛在的感染風(fēng)險,。

三、便捷操作

綜合各項指標(biāo)特性,，研發(fā)出操作便捷的試劑盒,。從樣本制備到結(jié)果分析，每一步都有清晰的操作指南,，即使是新手也能輕松上手,。

四、多樣的檢測驗證樣本

該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗證,，適用于剖檢豬取腸內(nèi)容物和腸系膜淋巴結(jié)等多種常見樣本,，滿足不同的檢測需求。

五,、個性化定制服務(wù)

專業(yè)的研發(fā)團隊可為您提供個性化的定制服務(wù),，根據(jù)您的特殊需求進行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整，為您提供更貼合實際的檢測方案,。

六,、豐富的產(chǎn)品線

除了TGEV/PEDV/PRV-A三重?zé)晒釶CR試劑盒,，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測需求,。

七,、完善的售前售后服務(wù)

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團隊，在您購買前為您提供詳細的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持,，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題,，讓您無后顧之憂。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒,，可滿足一定規(guī)模的檢測需求,。

檢測方法

實時熒光PCR，具有快速,、準(zhǔn)確,、靈敏等優(yōu)點。

適用儀器

ABI 7300 ,、7500 ,、ABI Stepone/Stepone Plus 、安捷倫 MX3000P/3005P ,、Roche Gene 6000 ,、Roche LC480 、 

Bio-RadCFX96 等熒光定量 PCR 檢測儀,。

標(biāo)本采集

剖檢豬取腸內(nèi)容物和腸系膜淋巴結(jié),；待檢活豬，取排泄物,，于離心管中,。

保存和運輸

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃,，但不能超過 6 個月,，標(biāo)本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融,。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

組織：分別從腸系膜淋巴結(jié)的 3 個不同位置取樣,，稱取樣品約 1g，用手術(shù)-剪剪碎混勻,，再稱取 0.5g 于研磨器中研磨,，加入 1.5mL 生理鹽水繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,，8000rpm 離心 2min,，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；排泄物：取 0.5g 于 1.5mL 滅菌離心管中,，加入 1mL 生理鹽水渦旋振蕩,， 8000rpm 離心 2min,，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2核酸提取

推薦采用公司生產(chǎn)的核酸-提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取,，請按    照試劑說明書進行操作,。

2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N（N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照,；反應(yīng)管數(shù)每滿 10 份,，多配制 1 份），每測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑TGEV/PEDV/PRV-A 反應(yīng)液酶液

用量20μL1μL

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,，21μL/管,。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸,、陽性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,，蓋好管蓋,，混勻， 短暫離心,。

4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi),；

4.2設(shè)置好通道、樣品信息,，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL,；熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM、TEXAS RED,、CY5,， 淬滅通道（Quencher Dye）ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可,。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時間收集熒光信號

11cycle42℃20min否

21 cycle95℃10min否

340 cycle94℃15sec否

55℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值（一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)）,、stop 值（一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)）,，以及 Threshold 的 Value 值（上下拖動閾值線至高于陰性對照），重新分析結(jié)果,。

5.2結(jié)果判斷

FAM 通道為豬流行性腹瀉病毒檢測結(jié)果,，CY5 通道為豬傳染性胃腸炎病毒檢測結(jié)果，TEXAS RED 通道為豬 A 組輪狀病毒檢測結(jié)果

陽性：檢測通道 Ct 值≤35,，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線,；

可疑：檢測通道 35<Ct 值≤38，建議重復(fù)檢測,，如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤38,，且曲線有明顯的增長曲線,，判定為陽性，否則為陰性,；

陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值,。

6.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,，且 Ct 值≤32,； 以上條件應(yīng)同時滿足，否則實驗視為無效,。

7.檢測方法的局限性

1.樣本檢測結(jié)果與樣本收集,、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān),；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

3.陽性對照,、擴增產(chǎn)物泄漏,，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

4.病原體在流行過程中基因突變,、重組,，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

5.不同的提取方法存在提取效率差異,，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

6.試劑運輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果,；

7.本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段,。

注意事項：

1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進行,；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完-全混勻并短暫離心,；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存,；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊,；

5.使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理,、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器,；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理。

9.本產(chǎn)品僅供科研,。

選擇我們的TGEV/PEDV/PRV-A三重?zé)晒釶CR試劑盒,，就是選擇精準(zhǔn)、高效,、可靠的檢測方案,，為您的科研實驗保駕護航！