本產(chǎn)品僅供科研,，不得做其它用途

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本產(chǎn)品就是根據(jù)PCR原理專門開發(fā)的試劑盒,，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用,，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 提供陽性對照,，便于區(qū)分假陰性樣品,。

3. 產(chǎn)品精心優(yōu)化且特異性高，引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),，不會跟除此之外的其它微生物DNA發(fā)生交叉反應(yīng),。

4. PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳,。

5. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的PCR反應(yīng),。

6. 本產(chǎn)品只能用于定性實(shí)驗(yàn)，不能用于定量,。

7. 本產(chǎn)品只能用于科研

沙苑子探針法PCR鑒定試劑盒樣品的制備　

【試劑盒組成】

【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存,，避免反復(fù)凍融，有效期12個(gè)月,。

【適用儀器】 ABI7500、羅氏 96/480,、安捷倫,、伯樂、國產(chǎn)博日,、宏石等各種熒光定量 PCR 儀,。

定義和原理

PCR 探針法試劑盒是基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)，結(jié)合探針來檢測特定核酸序列的工具包,。其原理是在常規(guī) PCR 基礎(chǔ)上,，加入了一段能與目標(biāo)核酸序列特異性結(jié)合的熒光標(biāo)記探針。在 PCR 擴(kuò)增過程中,，當(dāng)探針與目標(biāo)序列結(jié)合后,，通過熒光信號的變化來實(shí)時(shí)監(jiān)測 PCR 產(chǎn)物的擴(kuò)增情況。

主要組成成分

引物：是一小段單鏈 DNA 或 RNA,，與目標(biāo)核酸序列兩端互補(bǔ),，引導(dǎo) DNA 聚合酶進(jìn)行 DNA 合成，決定了 PCR 擴(kuò)增的特異性和范圍,。

探針：帶有熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán),，在完整狀態(tài)下,，淬滅基團(tuán)抑制熒光基團(tuán)的熒光信號。當(dāng)探針與目標(biāo)序列結(jié)合并被核酸酶切割后,，熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)分離,，從而產(chǎn)生熒光信號。

DNA 聚合酶：負(fù)責(zé)在引物的引導(dǎo)下,，將脫氧核苷酸（dNTPs）逐個(gè)添加到引物的 3' 端,，合成新的 DNA 鏈。

dNTPs：即脫氧核苷三磷酸,，包括 dATP,、dTTP、dCTP 和 dGTP,，是合成 DNA 的原料,。

反應(yīng)緩沖液：為 PCR 反應(yīng)提供適宜的 pH 值、離子強(qiáng)度等環(huán)境條件,，保證 DNA 聚合酶的活性和反應(yīng)的順利進(jìn)行,。

常見類型

TaqMan 探針法試劑盒：TaqMan 探針是一種寡核苷酸探針，其 5' 端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán),，3' 端標(biāo)記淬滅基團(tuán),。在 PCR 擴(kuò)增過程中，Taq DNA 聚合酶的 5'-3' 外切酶活性會將與目標(biāo)序列結(jié)合的探針切割,，使熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)分離,，熒光信號增強(qiáng)。通過檢測熒光信號的強(qiáng)度,，可以實(shí)時(shí)監(jiān)測 PCR 產(chǎn)物的擴(kuò)增情況,。

分子信標(biāo)探針法試劑盒：分子信標(biāo)是一種具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的寡核苷酸探針，其兩端分別標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán),。在沒有目標(biāo)序列存在時(shí),，分子信標(biāo)呈發(fā)夾結(jié)構(gòu)，熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)靠近,，熒光信號被淬滅,。當(dāng)存在目標(biāo)序列時(shí)，分子信標(biāo)與目標(biāo)序列雜交,，發(fā)夾結(jié)構(gòu)打開,，熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)分離，產(chǎn)生熒光信號,。

優(yōu)點(diǎn)

高特異性：探針與目標(biāo)序列的特異性結(jié)合,，大大提高了檢測的準(zhǔn)確性，能夠有效區(qū)分相似的核酸序列,。

高靈敏度：可以檢測到低拷貝數(shù)的目標(biāo)核酸,，適合微量樣品的檢測,。

實(shí)時(shí)監(jiān)測：能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測 PCR 擴(kuò)增過程，準(zhǔn)確地測定起始模板的拷貝數(shù),。

操作簡便：試劑盒提供了預(yù)混好的反應(yīng)體系,，減少了操作步驟和誤差。

【注意事項(xiàng)】

1.使用本試劑盒的實(shí)驗(yàn)室,，應(yīng)嚴(yán)格按照國家有關(guān)部分頒布的有關(guān)基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范進(jìn)行管理,；

2.為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測,；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理；

3.各區(qū)域物品均為專用,，不得交叉使用,，以免污染；檢測結(jié)束后,，應(yīng)立即對工作臺清潔,；

4.吸取反應(yīng)液時(shí)，應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡,；上 PCR 儀前,，應(yīng)注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊，以免液體蒸發(fā)造成結(jié)果不準(zhǔn)確,；

5.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,，并應(yīng)瞬時(shí)離心；

6.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),，并單獨(dú)存放,；

7.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記；

8.檢測過程中使用過的吸頭,，應(yīng)直接打到盛有 10%次氯酸的廢物缸內(nèi),，檢測結(jié)束的PCR 反應(yīng)管，切忌開蓋,，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄,；工作臺及各種實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)定期用 10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進(jìn)行消毒,；

9.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置,；不同批號試劑不能混用；并在有效期內(nèi)使用,。

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