1,、標(biāo)本間交叉污染:標(biāo)本污染主要有收集標(biāo)本的容器被污染,,或標(biāo)本放置時(shí),,由于密封不嚴(yán)溢于容器外,,或容器外粘有標(biāo)本而造成相互間交叉污染;標(biāo)本核酸模板在提取過程中,,由于吸樣槍污染導(dǎo)致標(biāo)本間污染;有些微生物標(biāo)本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴(kuò)散,導(dǎo)致彼此間的污染,。
2,、PCR試劑的污染: 主要是由于在PCR試劑配制過程中,由于加樣槍,、容器,、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
3,、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染.這是PCR反應(yīng)中最主要的污染問題.因?yàn)镻CR產(chǎn)物拷貝量大(一般為1013拷貝/ml),,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限,所以極微量的PCR產(chǎn)物污染,,就可造成假陽就可形成假陽性,。
還有一種容易忽視,最可能造成PCR產(chǎn)物污染的形式是氣溶膠污染;在空氣與液體面摩擦?xí)r就可形成氣溶膠,,在操作時(shí)比較劇烈地?fù)u動(dòng)反應(yīng)管,,開蓋時(shí)、吸樣時(shí)及污染進(jìn)樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染.據(jù)計(jì)算一個(gè)氣溶膠顆??珊?8000拷貝,,因而由其造成的污染是一個(gè)值得特別重視的問題。
4,、實(shí)驗(yàn)室中克隆質(zhì)粒的污染:在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室及某些用克隆質(zhì)粒做陽性對(duì)照的檢驗(yàn)室,,這個(gè)問題也比較常見.因?yàn)榭寺≠|(zhì)粒在單位容積內(nèi)含量相當(dāng)高,另外在純化過程中需用較多的用具及試劑,,而且在活細(xì)胞內(nèi)的質(zhì)粒,,由于活細(xì)胞的生長繁殖的簡(jiǎn)便性及具有很強(qiáng)的生命力.其污染可能性也很大。
污染的監(jiān)測(cè):一個(gè)好的實(shí)驗(yàn)室,,要時(shí)刻注意污染的監(jiān)測(cè),,考慮有無污染是什么原因造成的污染,以 便采取措施,,防止和消除污染,。
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