堿性磷酸酶（ALP）在堿性環(huán)境中催化磷酸酯的水解,，生成有機(jī)自由基和無機(jī)磷酸鹽。 在哺乳動物中,，這種酶主要存在于肝臟和骨骼中,。血清中ALP水平顯著升高，一種被稱為高堿性磷酸酶血癥的疾病,，與惡性膽道梗阻、原發(fā)性膽汁性肝硬化,、原發(fā)性硬化性膽管炎,、肝淋巴瘤和結(jié)節(jié)病有關(guān)。

簡單,、直接且易于自動化的血清中ALP活性檢測程序在研究和藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域越來越受歡迎,。 BioAssay Systems的QuantiChrom?堿性磷酸酶檢測試劑盒專為直接在生物樣本中測定ALP活性而設(shè)計(jì)，無需預(yù)處理,。改進(jìn)的方法利用對硝基苯磷酸酯作為底物,，該底物可被ALP水解生成黃色產(chǎn)物（最大吸收波長為405 nm）。反應(yīng)速率與酶活性成正比,。

對硝基苯磷酸酯 → 對硝基苯酚 + 磷酸

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理,，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品堿性磷酸酶測定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研,，不可用于臨床診斷,。

主要特點(diǎn)

- 高靈敏度和寬線性范圍,。 使用5 ?L血清或血漿樣本。檢測限為2 U/L,，線性范圍高達(dá)800 U/L,。

- 均質(zhì)且簡單的操作程序。 簡單的“混合即測”程序可在5分鐘內(nèi)可靠定量ALP活性,。

- 穩(wěn)健且適用于高通量篩選（HTS）,。 所有試劑均與高通量液體處理儀器兼容。

應(yīng)用

- 直接檢測：血清,、血漿及其他來源中的ALP活性,。

- ALP生產(chǎn)過程中的特性分析和質(zhì)量控制。

- 藥物發(fā)現(xiàn)：高通量篩選ALP抑制劑以及評估ALP抑制劑的效果,。

試劑盒組成（96孔板,，250次檢測）

- 檢測緩沖液：50 mL，pH 10.5

- 醋酸鎂：1.5 mL,，0.2 M

- pNPP液體：600 ?L,，1 M

- 校準(zhǔn)液：10 mL

- 酒石酸

儲存條件

- 試劑盒在室溫下運(yùn)輸。將pNPP液體存于-20°C,，其他組分存于4°C,。

- 保質(zhì)期：收到后12個月。

注意事項(xiàng)

- 試劑僅供研究使用,。使用試劑時(shí)應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)預(yù)防措施,。請參閱材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細(xì)信息。

操作程序

- 本檢測基于動力學(xué)反應(yīng),。建議使用多通道移液器,。向樣本中加入工作試劑應(yīng)迅速，混合應(yīng)簡短但充分,。檢測可在室溫或37°C下進(jìn)行,。

- 試劑準(zhǔn)備：將試劑平衡至室溫。工作溶液的配制：對于每次96孔檢測,，將200 ?L檢測緩沖液,、5 ?L醋酸鎂（最終濃度5 mM）和2 ?L pNPP液體底物（10 mM）混合。建議每次檢測前新鮮配制,，盡管工作溶液在室溫下至少穩(wěn)定一天,。

- 樣本準(zhǔn)備：ALP在4°C下可穩(wěn)定保存48小時(shí)，在-20°C下可穩(wěn)定保存2個月,。EDTA,、草酸鹽、氟化物和檸檬酸鹽是已知的ALP抑制劑，應(yīng)在樣本準(zhǔn)備過程中避免使用,。血清,、血漿（不含EDTA/檸檬酸鹽，最好是未溶血的）和細(xì)胞培養(yǎng)基可以直接檢測,。要檢測細(xì)胞內(nèi)的ALP,，可以按照以下方法制備細(xì)胞裂解液：用PBS洗滌10?個細(xì)胞，并在室溫下用0.5 mL蒸餾水中的0.2% Triton X-100震蕩20分鐘進(jìn)行裂解,。

實(shí)例

使用96孔板方案,。人的ALP活性（U/L）為13.4±0.4大鼠血清為190.4±1.6，山羊血清為202.8±4.3,。

96孔平板測定ALP反應(yīng)動力學(xué)隨著ALP濃度的增加

文獻(xiàn)參考：

1. Sul, et al. (2020). Atherogenic diet-induced bone loss is primarily due to increased osteoclastogenesis in mice. The Journal of Nutritional Biochemistry. 79: 108337.

2. Harb, S. V., et al. (2020). Hydroxyapatite and β-TCP modified PMMATiO2 and PMMA-ZrO2 coatings for bioactive corrosion protection of Ti6Al4V implants. Materials Science and Engineering: C. 116: 111149.

3. Harper, E., et al. (2020). RANKL treatment of vascular endothelial cells leading to paracrine pro-calcific signaling involves ROS production.Molecular and Cellular Biochemistry. 464(1-2): 111-117. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司,，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒,，產(chǎn)品種類齊全,，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長的需求,。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗(yàn),，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué),；2.酶活性測定,；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激,；5.高通量HTS試劑,；6.陰陽離子檢測。

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