精氨酸酶（L-精氨酸脲水解酶,，EC 3.5.3.1）存在于哺乳動物和植物中。 在人類中,，精氨酸酶主要在肝臟中表達,，也在乳腺、腎臟,、睪丸,、唾液腺、表皮和紅細胞中少量表達,。精氨酸酶催化精氨酸轉(zhuǎn)化為鳥氨酸和尿素,，完成尿素循環(huán)的最后一步。精氨酸酶活性是一個關(guān)鍵的診斷指標,。血液中精氨酸酶活性的增加與肝損傷有關(guān),。由于精氨酸酶缺乏引起的高精氨酸血癥是一種常染色體隱性遺傳疾病。

在研究和藥物發(fā)現(xiàn)中,，用于測量生物樣本中精氨酸酶活性的簡單,、直接且易于自動化的檢測方法非常受歡迎。 BioAssay Systems的精氨酸酶檢測試劑盒提供了一種靈敏且便捷的精氨酸酶活性測定方法,。該方法利用一種顯色劑,，該顯色劑僅與精氨酸酶反應(yīng)中產(chǎn)生的尿素特異性結(jié)合形成有色復(fù)合物。顏色的強度與樣本中的精氨酸酶活性成正比,。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理,，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品精氨酸酶測定試劑盒(100T)。產(chǎn)品僅用于科研,，不可用于臨床診斷,。

主要特點

- 靈敏且準確。檢測限：在96孔板檢測格式中,，2小時精氨酸酶反應(yīng)的檢測限為0.3 U/L,。

- 簡單且高通量。該程序涉及將提供的底物與樣本在微孔板中共孵育,，然后加入顯色試劑,。可以輕松自動化，每天可檢測數(shù)千個樣本,。

應(yīng)用

- 直接檢測：酶制劑,、血清、血漿,、細胞培養(yǎng)等中的精氨酸酶活性,；

- 藥物發(fā)現(xiàn)/藥理學(xué)：藥物對精氨酸酶活性的影響。

試劑盒組成

- 精氨酸緩沖液（pH 9.5）：1.5 mL

- 錳溶液：300 ?L

- 試劑A：12 mL

- 試劑B：12 mL

- 尿素標準品（50 mg/dL）：0.5 mL

儲存條件

- 試劑盒在室溫下運輸,。將精氨酸緩沖液和尿素標準品存于-20°C,，其他組分存于2-8°C。

- 保質(zhì)期：收到后12個月,。

注意事項

- 試劑僅供研究使用,。使用試劑時應(yīng)遵循實驗室試劑的常規(guī)預(yù)防措施。請參閱材料安全數(shù)據(jù)表以獲取詳細信息,。

樣本準備

- 血清和血漿樣本含有尿素,。可以使用膜過濾器（例如Millipore的Amicon Ultra-0.5,，Ultracel-10膜,，10 kDa）通過以下程序耗盡尿素：

  1. 將最多100 ?L樣本裝入Amicon Ultra-0.5（10 kDa截止）中，并用水稀釋至500 ?L,。以14,000 rpm離心30分鐘,，檢查樣本液面，理想情況下樣本液面應(yīng)少于50 ?L,。加水至500 ?L并重復(fù)離心。

  2. 將濃縮的樣本稀釋液傾倒出來,，并用移液管測量最終體積,。調(diào)整最終體積，以便有足夠的樣本用于反應(yīng)和反應(yīng)空白,。

- 細胞裂解液：每份樣本收獲約10?個細胞,，并用PBS洗滌。在4°C下以1,000g離心10分鐘,。在100 ?L 10 mM Tris-HCl（pH 7.4）中裂解細胞團塊,，其中含有1 ?M pepstatin A、1 ?M leupeptin和0.4%（w/v）Triton X-100,。在4°C下以14,000g離心裂解液10分鐘,。使用上清液進行精氨酸酶檢測。

檢測程序

- 在檢測前將所有試劑平衡至室溫,。精氨酸緩沖液應(yīng)預(yù)熱至37°C,。重要提示：在制備后2小時內(nèi)使用復(fù)溶試劑。

  1. 尿素標準品。通過將24 ?L 50 mg/dL尿素和176 ?L水混合制備1 mM尿素標準品,。將50 ?L 1 mM尿素標準品和50 ?L去離子水分別加入96孔板的不同孔中,。

  2. 精氨酸酶反應(yīng)：將4體積的精氨酸緩沖液和1體積的錳溶液混合制備5×底物緩沖液。每個測試需要10 ?L 5×底物緩沖液,。接下來,，將每個樣本的40 ?L分別加入96孔板的兩個不同孔中。向其中一個樣本孔中加入10 ?L 5×底物緩沖液（ODSAMPLE）,。另一個樣本孔不加5×底物緩沖液（樣本空白對照,，ODBLANK）。在37°C下孵育反應(yīng)板2小時或所需反應(yīng)時間,。

     - 注意：根據(jù)精氨酸酶活性,，樣本可能需要用去離子水稀釋。盡管檢測在2小時精氨酸酶反應(yīng)中線性范圍為0.3-20 U/L,，但如果樣本稀釋后表觀活性在1-10 U/L之間,，檢測效果很好。

  3. 尿素測定：將等體積的試劑A和試劑B混合制備尿素試劑,。向所有孔中加入200 ?L尿素試劑（注意：尿素試劑會終止精氨酸酶反應(yīng)）,，然后向樣本空白對照孔中加入10 ?L 5×底物緩沖液。輕拍板以混合,。在室溫下孵育60分鐘,，并在430 nm處讀取吸光度。

     - 注意：對于某些樣本,，加入尿素試劑可能會導(dǎo)致渾濁,。如果發(fā)生這種情況，請將樣本轉(zhuǎn)移到Eppendorf管中,，并以14,000 rpm離心5分鐘,。將上清液轉(zhuǎn)移回反應(yīng)板，并讀取吸光度,。

計算

其中,，ODSAMPLE、ODBLANK,、ODSTANDARD和ODWATER分別是樣本,、樣本空白、標準品和水的吸光度值,。[尿素標準品] = 1 mM,，t為反應(yīng)時間（120分鐘）。50和40分別是反應(yīng)和樣本體積（?L）,。

- 精氨酸酶反應(yīng)的孵育時間可以根據(jù)精氨酸酶活性變化（0.5至4小時）,。如果(ODSAMPLE – ODBLANK)/(ODSTANDARD – ODWATER)大于2,，則可以將樣本稀釋于去離子水中，重復(fù)檢測,，并將結(jié)果乘以稀釋因子,，或者使用更短的精氨酸酶反應(yīng)時間。

- 單位定義：1單位精氨酸酶在pH 9.5和37°C下,，每分鐘將1 ?mol L-精氨酸轉(zhuǎn)化為鳥氨酸和尿素,。

文獻參考：

1. Moertel, L. et al. (2008) Comparative real-time PCR and enzyme analysis of selected gender-associated molecules in Schistosoma japonicum. Parasitology 135, 575–583.

2. Pulichino, A.M. et al. (2008) Identification of Transforming Growth Factor β1–Driven Genetic Programs of Acute Lung Fibrosis. Am. J. Respiratory Cell & Mol. Biol. 39: 324-336.

3. Ndolo, E.A. et al. (2010) The Role of Lysosomes in Limiting Drug Toxicity in Mice. J Pharmacol Exp Ther. 333:120-128. 

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā),、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒,，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā),，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長的需求,。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測試劑盒,。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué),；2.酶活性測定；3.能量代謝,；4.氧化應(yīng)激,；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測,。

作為BioAssay Systems在中國區(qū)域的代理,，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品。

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