NobleRyderCA9098  CCK-8試劑盒(細胞增殖及毒性檢測試劑盒)CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

產(chǎn)品貨號：CA9098

產(chǎn)品名稱：CCK-8試劑盒(細胞增殖及毒性檢測試劑盒)CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

英文名稱：CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：10*1000T/10*500T/1000T/100T/500T

CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑盒

產(chǎn)品簡介：

別名：CCK-8 WST-8

儲存條件：4℃密封避光

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyderCA9098  CCK-8試劑盒(細胞增殖及毒性檢測試劑盒)CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit  是一種基于 WST-8的快速,、高靈敏度細胞活性檢測的試劑盒，廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的檢測,。WST-8是一種類似于MTT的化合物,，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性甲臜化合物,。細胞增殖越多越快,，則顏色越深,；細胞毒性越大，則顏色越淺,。對于同種類型細胞,，顏色深淺與細胞數(shù)量在一定限度內(nèi)呈線性關(guān)系。

本試劑盒為即用型溶液,，無需再行配制,，可直接用于96孔板細胞實驗，省略了細胞洗滌與收集等步驟,。該試劑盒可用于細胞因子等誘導(dǎo)的細胞增殖檢測,，也可用于抗癌藥物等對細胞有毒試劑誘導(dǎo)的細胞毒性檢測，或一些藥物誘導(dǎo)的細胞生長抑制檢測,。

操作步驟：（僅供參考）

一,、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.先用細胞ji數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量，然后接種細胞,。

2.按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每組3-6個復(fù)孔,。

3.接種后培養(yǎng)至細胞貼壁,，然后加CCK-8溶液培養(yǎng)一定時間后測定OD值，制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標(biāo)（X軸）,，OD值為縱坐標(biāo)（Y軸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

4.根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量（試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時間,。）

二,、細胞活性檢測

1.在96孔板中接種細胞懸液（100µL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（在37℃,，5%CO2的條件下）,。

2.向培養(yǎng)板加入10µL不同濃度的待測物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段時間（例如：6,、12,、24或48小時）。

 3.向培養(yǎng)板加入10µL不同濃度的待測物質(zhì),。在培養(yǎng)箱孵育一段時間（例如：6,、12、24或48小時）,。向每孔加入10µLCCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會影響 OD 值的讀數(shù)）。如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話,，可在加CCK-8溶液之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基,，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響,。

 4.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時,，用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。

 5.如果暫時不測定 OD 值,，可以向每孔中加入10µL0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化,。

活力計算：

細胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[A(0 加藥)－A(空白)]×100

A（加藥）：具有細胞,、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A（空白）：具有培養(yǎng)基和 CCK-8溶液而沒有細胞的孔的吸光度

A（0加藥）：具有細胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力

注意事項：

1.本試劑顏色應(yīng)為粉紅色,，如果發(fā)現(xiàn)溶液變黃應(yīng)棄用,。

 2.由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間較長,，一定要注意蒸發(fā)問題,。由于96孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法,，改加相同量的PBS,、水或培養(yǎng)液。

 3.本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應(yīng),，所以還原劑(例如一些抗氧化劑)會干擾檢測,，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，需設(shè)法去除,。

 4.建議先做幾個孔摸索接種細胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間,，白細胞可能培養(yǎng)時間較長,。

 5.當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時,，貼壁細胞的最小接種量至少為1000個/孔 (100µL培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,，因此推薦接種量不低于2500 個/孔 (100µL培養(yǎng)基),。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應(yīng)的接種量,，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液,。

 6.如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490nm之間的濾光片,，但是450nm檢測靈敏度最高,。

 7.培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,，因此不會對檢測造成影響,。

CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑盒 

產(chǎn)品訂購信息：

CA9098  CCK-8試劑盒(細胞增殖及毒性檢測試劑盒)CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit  10*1000T/10*500T/1000T/100T/500T