諾博萊德 植物核蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn),、質(zhì)譜適用）-酶法

植物核蛋白提取試劑盒-酶法 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P5078

產(chǎn)品名稱：植物核蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn),、質(zhì)譜適用）-酶法

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：植物核蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-酶法

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃,，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5078 植物核蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn),、質(zhì)譜適用）-酶法

植物核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細(xì)胞和各種實(shí)體植物組織,，如葉片,、根、種子等植物組織中提取核蛋白,。提取過程簡(jiǎn)單方便,，可在1小時(shí)內(nèi)完成。制備的核蛋白不僅純度高,，保持天然活性,，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解植物核組份,。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物,，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份,，不含SDS,、TritonX-100、chaps等可能影響質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的組份,，最后得到的蛋白質(zhì)樣品經(jīng)過透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑,、高濃度鹽等影響，基本可以滿足下游任意的蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究,。本產(chǎn)品的蛋白酶抑制劑混合物中不含AEBSF,，可以避免由于AEBSF導(dǎo)致的質(zhì)譜峰漂移，因此使用本產(chǎn)品提取的蛋白樣品可以用于質(zhì)譜（MassSpectrometry,MS）檢測(cè)和分析,，蛋白質(zhì)組學(xué)（proteomics）等相關(guān)研究,。本試劑盒提取的蛋白也可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳,、免疫沉淀,、ELISA,、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn),。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA,，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容,。

適用樣本：植物

注：

1. 提取液A 長(zhǎng)期不用請(qǐng)置-20℃保存。

2. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存,。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存,。

3. 蛋白酶抑制劑在 2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時(shí)間水浴,，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋,。

4. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

植物核蛋白提取試劑盒提供全套試劑,，適用于從各種植物細(xì)胞和各種實(shí)體植物組織,，如葉片、根,、種子等植物組織中提取核蛋白,。提取過程簡(jiǎn)單方便，可在 1 小時(shí)內(nèi)完成,。制備的核蛋白不僅純度高,，保持天然活性，而且絕少交叉污染,。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解植物核組份,。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合

物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證,。

本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份,，不含 SDS、Triton X-100,、chaps 等可能影響質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的組份,，最后得到的蛋白質(zhì)樣品經(jīng)過透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等成分,，基本可以滿足下游任意的蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究,。

本產(chǎn)品的蛋白酶抑制劑混合物中不含 AEBSF，可以避免由于 AEBSF 導(dǎo)致的質(zhì)譜峰漂移,，因此使用本產(chǎn)品提取的蛋白樣品可以用于質(zhì)譜(Mass Spectrometry, MS)檢測(cè)和分析,，蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)等相關(guān)研究。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白,。

本試劑盒中不含有 EDTA,，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白也可用于 Western Blotting,、蛋白質(zhì)電泳,、免疫沉淀、ELISA,、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn),。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA,，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容,。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分,，不可直接用于2D 電泳,，如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳,，請(qǐng)使用其他貨號(hào)試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D 電泳,，用脫鹽柱脫鹽處理,。

本試劑盒采用酶法提取,，酶法提取制備的植物核蛋白，回收率提高,，純度高,，但是耗時(shí)較長(zhǎng)。非酶法的提取試劑盒提取過程簡(jiǎn)單方便,，速度快,，可在1 小時(shí)內(nèi)完成，而且絕少交叉污染,，提取得到的蛋白活性優(yōu)于酶法提取,，但是回收率相比酶法較低。如果需要更加快捷的提取試劑盒,，可以選擇非酶法的提取試劑盒,，對(duì)提取速度沒有要求的話,，可以選擇酶法提取試劑盒,。請(qǐng)根據(jù)實(shí)際需要選擇試劑盒。

自備試劑和儀器：

離心機(jī),、振蕩器、勻漿器,、渦旋混勻器、移液器,、冰箱,、冰盒,，1×PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒,，離心管,、吸頭、一次性手套,、100 μm 細(xì)胞篩,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 使用方便。

2. 含蛋白穩(wěn)定劑,，提取的蛋白穩(wěn)定,。

3. 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí),，背景干擾低。

4. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化,。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑 AEBSF,、Aprotinin、Leupeptin,、Pepstatin A,、Bestatin,、E-64,，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶,、天冬氨酸蛋白酶,、丙氨酰-氨基肽酶等,。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,，避免開蓋時(shí)液體灑落,。

2. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷,；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫,。

3. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,，不影響使用，溶解后正常使用,。

4. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

二,、植物組織核蛋白提取：

1. 提取液制備：

將試劑 B1 和試劑 B2 混合,，配成蛋白提取液 B,，充分混勻備用,。

每 500μl 提取液 B 中加入 2μl 蛋白酶抑制劑混合物,，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液,，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完,，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2. 取 500 mg-1 g 新鮮植物葉片樣本,，用純水洗凈擦干后去除葉梗和粗脈,，用手shu剪刀或鋒利的刀片剪切碎,，切成 0.5 mm*0.5 mm 細(xì)塊。

3. 加入 500μl 提取液 C,，充分混勻。

4. 將懸液置振蕩器上室溫振蕩 12-72 小時(shí),。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速,，保證提取液能輕微晃動(dòng)即可。

2) 沒有振蕩條件也可以不振蕩,，中間每隔幾小時(shí)用移液器輕輕吹打混勻即可。

3) 不同類型的植物樣本需要處理的時(shí)間差異較大,。擬南芥較易處理，鮮嫩葉片較易處理,，年齡小的樣本處理時(shí)間短,。

4) 部分細(xì)胞壁較厚的植物類型可能需要處理更長(zhǎng)時(shí)間?？梢匝娱L(zhǎng)至 72 小時(shí)以上處理以提高得率。

5. 在 1000×g 條件下離心 5-10 分鐘,，棄上清,，收集沉淀。

【注】：

1) 有條件可以用 100 um 細(xì)胞篩網(wǎng)過濾提取液處理液后,，收集濾液再離心,。

2) 沒有細(xì)胞篩可以不過濾,。

6. 在沉淀中加入 1 ml 提取液 A 后用勻漿機(jī)充分勻漿或者用勻漿器充分勻漿。

7. 將勻漿用 100μm 細(xì)胞篩過濾,。

【注】：

1) 液體量少時(shí)可以加入 1-2 ml PBS 混勻后再用細(xì)胞篩過濾,。

2) 沒有細(xì)胞篩時(shí)可以不過濾,，將勻漿液靜置 1 分鐘，待大的沒有破碎的組織塊自然沉降,，吸取上清。

3) 部分黏液較多的植物樣本可能難以吸取,，可以將 1 ml 吸頭的口剪掉一點(diǎn)再吸,。

8. 將濾液在 100×g 條件下離心 3 分鐘，棄沉淀,，收集上清,。

【注】：

1) 部分黏液較多的植物樣本可能很粘稠難以離心，可以加入 1-2 ml PBS 稀釋,，充分混勻

后再離心,。

9. 在 2000×g 條件下離心 10 分鐘，棄上清,，收集沉淀,。

10. 在沉淀中加入 150-250μl 提取液 B，充分混勻,。

11. 置振蕩器 2-8℃振蕩 30-45 分鐘,。

【注】：

1) 用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體有輕微晃動(dòng)即可,。

2) 沒有低溫振蕩條件可以不振蕩，在 2-8℃靜置,，稍微延長(zhǎng)處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻,。

12. 在 4℃，12000×g 條件下離心 15 分鐘,。

13. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,，即得到核蛋白,。

14. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量,。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉,，不要被細(xì)菌污染。

15. 將蛋白樣品透析處理或者脫鹽柱脫鹽處理后用于下游實(shí)驗(yàn),。

【注】：

1) 蛋白樣品中含有鹽，需要脫鹽處理后用于雙向電泳,。

2) 經(jīng)透析或脫鹽離心柱處理的蛋白樣品不含有去垢劑和高濃度鹽。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果,。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,，避免開蓋時(shí)試劑損失,。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用,，否則會(huì)影響使用效果,。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭,、管,、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑,。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

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