諾博萊德 酵母線粒體膜蛋白提取試劑盒

酵母線粒體膜蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號：P5029

產(chǎn)品名稱：酵母線粒體膜蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：酵母線粒體膜蛋白提取試劑盒

規(guī)格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃,，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyder P5029 酵母線粒體膜蛋白提取試劑盒

適用樣本：酵母

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存,。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài),，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴,，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完,！

產(chǎn)品簡介：

酵母線粒體膜蛋白提取試劑盒提供全套試劑,，適用于從各種酵母樣本中提取線粒體膜蛋白。提取過程簡單方便,。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解線粒體膜組份,。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解,，為提取高純度的蛋白提供了保證,。

本試劑盒提取的線粒體膜蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳,、免疫沉淀,、ELISA、酶活性測定等下游蛋白研究實驗,。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白,，下游應(yīng)用范圍廣，提取液裂解細胞的能力較溫和,，需要根據(jù)實際樣本情況優(yōu)化裂解時間,。

本試劑盒中不含有EDTA,，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容,。

本試劑盒提取的膜蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳,，需要透析,、脫鹽后再用于2D電泳,。

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器,、渦旋混勻器,、移液器、冰箱,、冰盒,、PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒,、離心管,、吸頭、一次性手套

使用方法：

一,、使用注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預(yù)實驗,，以優(yōu)化實驗條件，取得優(yōu)良實驗效果,。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失,。

3. 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷,；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫,。

4. 提取液D在使用前須一直置于2-8℃條件,，否則下游膜蛋白提取時會導(dǎo)致不容易分層。

5. 膜蛋白電泳時loading buffer應(yīng)該避免煮沸,。

6. 膜蛋白電泳時可以提高 loading

二,、酵母線粒體膜蛋白提取：

1. 提取液制備：

每 500μl 冷的酵母線粒體膜蛋白提取液 D 中加入 2μl 蛋白酶抑制劑混合物,，混勻后置冰上備用,。

2. 取適量酵母培養(yǎng)物，在 4℃,，1000×g 條件下離心 5-10 分鐘,，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干,，收集酵母沉淀,。

3. 用 PBS 洗滌酵母兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清,。

4. 每 100-200ul 體積或 100-200mg 濕重酵母沉淀物中加入 400ul 酵母線粒體提取液 A,，混勻后，在30℃條件下保溫 15 分鐘,。

5. 在 1000×g 條件下離心 5-10 分鐘,，收集酵母沉淀,。

6. 酵母沉淀物中加入 500ul 酵母線粒體提取液 B，充分混勻后,。

7. 在 37℃或室溫條件下輕微振蕩 30-90 分鐘,。

8. 在 2000×g 條件下離心 5-10 分鐘，棄上清,，收集沉淀,。

9. 沉淀用 PBS 洗滌兩次。離心收集沉淀,。

10. 在沉淀中加入 800μl 酵母線粒體提取液 C,，充分混勻，然后在振蕩器上振蕩 15-30 分鐘,。

11. 在 4℃,，500×g 條件下離心 5 分鐘，棄沉淀,，收集上清,。

12. 將上清在 4℃，1000×g 條件下離心 5 分鐘,，棄沉淀,，收集上清。

13. 將上清在 4℃,，14000×g 條件下離心 20 分鐘,。棄上清，收集沉淀,。

14. 在沉淀中加入 200-400μl 冷的線粒體膜蛋白提取液 D,，充分混勻。

15.在 2-8℃條件下振蕩 20-40 分鐘,。

16. 在 4℃,，12000×g 條件下離心 5 分鐘。

17. 將上清吸入另一干凈離心管,，在 37℃水浴 5-10 分鐘,。

18. 在 37℃，1000×g 條件下離心 5 分鐘,，此時溶液分為 2 層,，小心移除上層部分，下層即為線粒體膜蛋白,，約為 20-40ul,。

19. 用 50-100ul 膜蛋白溶解液 E 溶解下層，即得酵母線粒體膜膜蛋白樣品。

20. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?/span>

注意事項：

1. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭,、管,、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑,。

3. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理,。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

5. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛,，應(yīng)立即用水沖洗,。

酵母線粒體膜蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品訂購信息：

P5029  酵母線粒體膜蛋白提取試劑盒  50T/100T