ECL化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒 顯色與信號(hào)檢測(cè)

NobleRyder  SW0898  ECL化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒（小鼠IgG）,Western blotting（小鼠IgG）

產(chǎn)品貨號(hào)：SW0898

產(chǎn)品名稱：ECL化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒（小鼠IgG）,Western blotting（小鼠IgG）

產(chǎn)品規(guī)格：1盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

英文名稱：Western blotting（小鼠IgG）

中文名稱：ECL化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒（小鼠IgG）

規(guī)格：1盒

儲(chǔ)存條件：-20℃，avoid light,，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder  SW0898  ECL化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒（小鼠IgG）,Western blotting（小鼠IgG）產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

SDS-PAGE電泳后,，蛋白質(zhì)按照分子量大小分離，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）后,，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),，以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),，再與酶標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),，加入發(fā)光底物后，能讓膠片感光,。經(jīng)顯影和定影后,，可以在膠片上顯示出條帶（抗原所在位置）。

操作步驟：(僅供參考)

常規(guī)電泳轉(zhuǎn)膜后:

1) 清洗轉(zhuǎn)印膜：將膜剝離下后,，作好標(biāo)記,，一般在左上角剪一缺口。室溫用 TBS-T 漂洗 3 次每次 5min,以盡量洗 去轉(zhuǎn)印膜上的 SDS,，防止影響后面的抗體結(jié)合,。

2) 按 5g 封閉試劑加 100ml 雙蒸水計(jì)，配制膜封閉液,，配好的膜封閉液為乳白色懸液,，將漂洗過(guò)的轉(zhuǎn)印膜放入封閉液內(nèi)，置搖床孵育,，室溫封閉 30min,。用 TBS-T 緩沖液（PH7.6）洗膜,，室溫漂洗 3 次每次 5min。

3) 將10×抗體稀釋液用雙蒸水稀釋成 1×（10ml 10×抗體稀釋液加入 90ml 雙蒸水,，混勻,，可 4℃保存三個(gè)月）。此稀釋液可作為一抗和二抗的稀釋液,。

4) 用 1×的抗體稀釋液稀釋一抗,。根據(jù)用量以及一抗的推薦稀釋濃度來(lái)稀釋一抗。將雜交膜放入雜交袋中,，加入 一抗工作液,，封口，4℃孵育過(guò)夜或 37℃搖動(dòng)孵育 2h,。此用過(guò)的抗體一般可回收第二天再使用一次,。注：如果所 加一抗不同，可在此步將膜沿電泳方向剪成條,，分別作好標(biāo)記,，分開孵育。

5) 用 TBS-T 緩沖液（PH7.6）洗膜,，室溫漂洗3次每次 5min,。

6) 用 1×的抗體稀釋液稀釋二抗。根據(jù)用量,，按10ml抗體稀釋液加入 1-2 ul HRP 標(biāo)記二抗的比例,，配制二抗工作 液。將雜交膜放入雜交袋中,，加入二抗工作液,，封口，37℃搖動(dòng)孵育 1h,。此用過(guò)的抗體一般可回收第二天再使用 一次,。

7) 用 TBS-T 緩沖液（PH7.6）洗膜，室溫漂洗3次每次10min,。

8) 根據(jù)用量,，取 ECL 發(fā)光液 A、B 等量混勻,，加在膜正面,，暗室顯色 1-5 分種。傾去顯色液,，小心用紙吸去顯色液,，在上面蓋一層平整的透明紙。再取出感光膠片,，做好標(biāo)記,，輕輕的放在膜上,，顯色 30 秒到 1 分鐘，取出膠片浸入顯影液中,，觀察顯色情況,，再放入定影液中 1 分鐘,。根據(jù)條帶強(qiáng)弱,，再次感光時(shí)可減短或者加長(zhǎng)感光時(shí)間（從 5 秒到 30 分鐘）以期達(dá)到理想結(jié)果,。

注意事項(xiàng)：

1. 請(qǐng)根據(jù)一抗來(lái)源選擇試劑盒。

2. 可以根據(jù)顯色結(jié)果來(lái)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)反應(yīng)時(shí)間,。如背景過(guò)深,，可延長(zhǎng)膜封閉時(shí)間,，加長(zhǎng)最終漂洗次數(shù)與時(shí)間,。如果條 帶過(guò)弱，可增加抗體濃度,，可延長(zhǎng)抗體孵育時(shí)間或加長(zhǎng)感光時(shí)間,。

3. TBS-T（0.01M，PH7.6）配制方法：稱取 NaCl 8.5g ,，Tris 1.21g ,，用 800ml 的雙蒸水溶解，用鹽酸調(diào) PH 到 7.6,， 再加入 0.5ml Tween－20,，用雙蒸水 加至 1000ml，混勻即可,。（也可按照自己的配制習(xí)慣來(lái)配制）

 ECL化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒 顯色與信號(hào)檢測(cè)