West Femto ECL化學發(fā)光底物顯色與信號檢測

產品介紹：
WestFemto 最高靈敏度底物是用于辣根過氧化物酶(HRP)的增強型化學發(fā)光底物
本產品特點：
1,、 靈敏—使用適當的一抗和二抗時,，可在硝化纖維膜或 PVDF 膜上檢測豐度為飛克級的蛋白條帶
2、定量—所得信號的可定量檢測范圍跨越兩個數量級,。 • 明亮信號—通過膠片或成像系統(tǒng)進行曝光,，易于捕獲圖像。
3,、長信號持續(xù)時間—優(yōu)化條件下,，可檢測的光信號輸出長達 8 小時。
4,、穩(wěn)定試劑—試劑盒組分能夠在 4°C 條件下穩(wěn)定放置一年，在室溫下可穩(wěn)定放置6 個月,。
5,、價格經濟—配方經過優(yōu)化，可適用于濃度極低的抗體檢測,。
6,、1ng至0.2μg/mL 一抗（以1μg/mL 儲存液稀釋 1:5,000 至 1:100,000 倍）
7、 2ng至10ng/mL 二抗（以1μg/mL 儲存液稀釋 1:100,000 至 1:500,000 倍） 當 West Femto 底物與優(yōu)化的抗體濃度和封閉緩沖液配合使用時,，可檢測到常規(guī) ECL 底物無法檢 測的低豐度靶標蛋白,。
使用方法：
注：優(yōu)化抗原和抗體的濃度。必須使用建議的抗體稀釋度,，以保證陽性結果,。有關建議的稀釋度范 圍請參考其他所需材料。
1) 將一抗?jié)舛认♂尩?1ng 至 0.2μg/mL（以 1μg/mL 儲存液稀釋 1:5,000 至 1:100,000 倍） 2) 將二抗?jié)舛认♂尩?2ng 至 10ng/mL（以 1μg/mL 儲存液稀釋 1:100,000 至 1:500,000 倍） 3) 將兩種底物組份按 1:1 比例混合,，制備底物工作液,。 注：暴漏于日光或任何其他強光可能損害工作液,，為獲得最佳結果，將此工作液保存在琥珀色瓶中,， 并避免長期暴漏于任何強光,。短時間暴漏于實驗室常規(guī)照明不會損害該工作液。
4) 將印跡膜在 WestFemtoECL 底物工作液中孵育5分鐘,。
5) 吸出多余試劑,。用清潔的塑料膜蓋住該印跡膜。
6) 使印跡膜在 X 光膠片上曝光,。
蛋白印跡法詳細操作步驟
1) 將印記膜從蛋白轉印設備中取出,，加入合適的封閉液在溫室下孵育 20-60 分鐘，同時振蕩,。以封閉膜上非特異性蛋白結合位點,。 請注意：使用在前文建議的抗體稀釋度是非常重要的。
2) 將膜從封閉液中取出,，與一抗工作液在溫室孵育 1 小時,，同時振蕩；或在 28℃孵育過夜,，不振蕩,。
3) 將足量的洗滌緩沖液加至膜上，保證緩沖液將膜wan全覆蓋,。振蕩孵育≥5 分鐘,，更換洗滌緩沖液 并重復該步驟 4-6 次。增加洗滌緩沖液體積,，洗滌次數和洗滌時間有助于降低背景信號,。 注：孵育前，膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會提高洗滌效率,。 請注意：使用在前文建議的 HRP 標記二抗稀釋度是非常重要的,。
4) 將 HRP 標記的二抗工作液與膜在溫室孵育1小時，同時振蕩,。
5) 重復步驟3,，以除去未結合的HRP 標記二抗。 注：膜與HRP標記二抗孵育后必須進行che底洗滌,。
6) 將A溶液與B液等比例混合,，制備成工作液。每cm2膜使用 0.01～0.1ml 工作液,。工作液可以 在溫室下穩(wěn)定 8 小時,。 注：暴漏雨日光或任何其他強光下可能損害工作液，為獲得嘴角結果,，將此工作液保存在琥珀色瓶中,，并避免長期暴漏雨任何強光,。實驗室的常見照明不會損害工作液。
7) 將印記膜在工作液中孵育5分鐘,。
8) 從工作液中取出印記膜,，并置于一個塑料片或清潔的塑料紙（膜）中，用一張吸水紙吸除多余 的液體,，并從印記和塑料紙之間小心地壓出氣泡,。
9) 將包在塑料紙（膜）中的印記膜置于膠片暗盒中，蛋白質面朝上,，除適用于膠片曝光的燈（如 紅色安全燈）之外,，關閉所有的燈。
注意：膠片必須在曝光期間保持干燥,，為獲得最佳效果,，采取以下措施：
* 確保將多余的底物從膜和塑料紙上wan全去除。
* 在整個膠片處理期間,，使用手套,。
* 切莫將印記膜置于已顯影的膠片上，因為膠片上的化學物質會減弱信號,。
10) 將X光膠片置于膜的上面,。建議第一次曝光 60 秒。之后可調整曝光時間以達到最佳結果,?；瘜W發(fā)光反應在底物孵育后的前 5-30 分鐘期間是zui強烈的。這一反應可以持續(xù)幾個小時,，但強度會隨時間下降,，如有底物孵育后較長時間后曝光，曝光時間可能需要延長以獲得較強信號,。如果使用 磷光存儲成像設備（如Bio-Rad的分子成像儀系統(tǒng)）或CCD 照相機可能需要較長的曝光時間,。
注意：膠片與膜之間的任何移動可能在膠片上造成人為的非特異信號。 11) 使用合適的顯影劑和定影劑對膠片進行顯影,。如果信號太強，則縮短曝光時間或將印記膜進行 剝離并降低抗體濃度重新檢測,。
重要提示：
1,、為獲得最佳效果，必須優(yōu)化該系統(tǒng)的全部組分,，包括樣品量,、一抗和二抗?jié)舛纫约澳ず头忾]試劑的類型。
2,、使用該產品比使用沉淀比色 HRP 底物檢測所需的抗體濃度低,。為優(yōu)化抗體濃度,，請進行一次 系統(tǒng)的點印跡分析。
3,、沒有一種封閉試劑對所有系統(tǒng)而言都是最佳的,，所以為每一個免疫印跡檢測系統(tǒng)找到最合適的 封閉緩沖液非常必需。封閉試劑有可能與抗體產生交叉反應,，導致出現非特異性信號,。封閉緩沖液同時也會影響系統(tǒng)的靈敏性。當從一種底物轉換為另一種底物時,，有時會出現信號衰減或背景增加 的現象,，原因可能是封閉緩沖液不適合新的檢測系統(tǒng)。
4,、使用親和素/生物su檢測系統(tǒng)時,，避免使用牛奶作為封閉試劑，因為牛奶中含有不定量的內源性生物su,，會導致高背景信號,。
5、保證洗滌緩沖液,、封閉緩沖液,、抗體溶液和底物工作液的使用體積，以確保在整個實驗過程中 印跡膜wan全被液體覆蓋,，避免膜變干,。增大封閉緩沖液及洗滌緩沖液的使用量可以降低非特異性的 信號。
6,、為獲得最佳效果,，在孵育步驟請使用搖床。
7,、 將 Tween20(終濃度 0.05-0.1%)加入封閉緩沖液和稀釋的抗體溶液,，以降低非特異信號。使用高品質的產品,，如去污劑,。它保存在安瓿中，過氧化物和其他雜質含量很低,。
8,、不要使用疊氮鈉作為緩沖液的防腐劑。疊氮鈉是 HRP 的抑制物,。
9,、避免手與膜直接接觸，實驗過程應戴手套或使用干凈的鑷子,。
10,、所有設備必須清潔且不沾染外來物質,。金屬器械（如剪刀）不得具有可見的銹跡。銹跡可能導 致斑點形成和高背景,。
11,、底物工作液在室溫下可穩(wěn)定8小時。日光或任何其他強光下可能損害底物,，為獲得最佳結果,，將底物工作液保存在琥珀色瓶中，并避免長期暴漏在任何強光下,，短時間暴漏于實驗室常規(guī)照明不會損害該工作液,。

West Femto ECL化學發(fā)光底物顯色與信號檢測