重組腺病毒載體快速檢測(cè)試劑盒

一,、原理

重組腺病毒（rAdv）載體是目前用于基因傳遞、體液和細(xì)胞免疫研究的載體之一,。包裝腺病毒以及腺病毒擴(kuò)增均需要進(jìn)行腺病毒復(fù)制效率的評(píng)價(jià),，通常方法是 TCID50測(cè)定、核酸雜交,、實(shí)時(shí)熒光定量 PCR,、SDS-PAGE 電泳等。重組腺病毒六鄰體蛋白快速檢測(cè)卡提供了一種可以在實(shí)驗(yàn)當(dāng)中對(duì)腺病毒載體進(jìn)行快速檢測(cè)的方法,。其原理是基于膠體金側(cè)向?qū)游黾夹g(shù)的蛋白半定量檢測(cè),，其主要結(jié)構(gòu)由層析膜、樣品墊,、金標(biāo)墊,、吸水紙、背板等組成,。在層析膜上固定有羊抗鼠多克隆抗體（質(zhì)控線）和腺病毒六鄰體蛋白鼠單克隆抗體（檢測(cè)線）,；在金標(biāo)墊上固定有膠體金標(biāo)記的另外一株腺病毒六鄰體蛋白鼠單克隆抗體。當(dāng)待測(cè)樣品滴加到樣品墊時(shí),，通過毛細(xì)作用,，液體向金標(biāo)墊移動(dòng)。當(dāng)液體通過金標(biāo)墊時(shí),，樣品中含有的腺病毒即與膠體金標(biāo)記的單克隆抗體結(jié)合,，形成病毒金標(biāo)抗體復(fù)合物,，當(dāng)復(fù)合物移動(dòng)到檢測(cè)線時(shí)，被固定在檢測(cè)線上的腺病毒抗體所捕獲,。隨著被捕獲的復(fù)合物的堆積,，在檢測(cè)線上呈現(xiàn)出紫紅色條帶。當(dāng)復(fù)合物移動(dòng)到質(zhì)控線時(shí),，羊抗鼠多抗捕獲膠體金標(biāo)記的鼠單克隆抗體,，在質(zhì)控線上呈現(xiàn)出紫紅色條帶。通過判讀層析膜上檢測(cè)線和質(zhì)控線是否顯色,，即可判斷樣品中是否存在重組腺病毒,。本檢測(cè)卡的檢測(cè)下限為108vp/ml，在108-1010vp/ml 的檢測(cè)范圍內(nèi),，隨腺病毒濃度提高,，檢測(cè)線條帶的顯色逐漸增強(qiáng)，腺病毒濃度與檢測(cè)線條帶強(qiáng)度呈現(xiàn)正相關(guān),。該檢測(cè)卡可以識(shí)別包括腺病毒3,、5、7,、11,、40、41型等多種亞型,。

重組腺病毒載體快速檢測(cè)試劑盒

二,、用途

5型重組腺病毒包裝或擴(kuò)增時(shí)的病毒滴度快速評(píng)估重組腺病毒載體效價(jià)評(píng)估方法有基于細(xì)胞病變的 TCID50測(cè)定、核酸雜交,、實(shí)時(shí)熒光定量 PCR,、SDS-PAGE 電泳等。這些方法均耗時(shí)耗力,，并且成本高昂,。與上述方法相比，腺病毒快速檢測(cè)卡使用簡(jiǎn)便,，檢測(cè)時(shí)間短,，可以隨時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)染、收毒,、擴(kuò)增,、純化效果進(jìn)行評(píng)估。如在更換培養(yǎng)基時(shí),，吸取樣品滴加到檢測(cè)卡上,，10~15min 后即可判讀結(jié)果。因此,，使用該快速檢測(cè)卡,，可以快速評(píng)估轉(zhuǎn)染效果,，減少不必要的時(shí)間和試劑浪費(fèi)。

三,、組成

1）檢測(cè)卡,；2） 稀釋液； 3）說明書

四,、使用方法

1.打開包裝取出檢測(cè)卡,，平放在生物安全柜臺(tái)面上；

2.用微量移液器吸取 20μl 細(xì)胞培養(yǎng)上清等,，滴加到樣品窗（S）中,；再加入 50μl 緩沖液；

3.室溫靜置10-15min后即可判讀結(jié)果,。

五,、結(jié)果判斷

1.在檢測(cè)窗中，質(zhì)控線（C）和檢測(cè)線（T）均顯色即為陽(yáng)性,；

2.質(zhì)控線（C）顯色,，檢測(cè)線（T）不顯色，檢測(cè)結(jié)果為陰性,；

3.質(zhì)控線（C）不顯色，無(wú)論檢測(cè)線（T）是否顯色,，檢測(cè)無(wú)效,。