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小鼠腎足突細胞(永生化)

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       上海富雨生物科技有限公司是一家集研發(fā),、銷售、技術服務于一體的高科技企業(yè)銷售和自產多種醫(yī)學科研用試劑 , 專注于生命科學和生物技術領域的技術企業(yè),,專業(yè)從事科研機構及生產企業(yè)所需要的科研試劑,、耗材、儀器以及技術服務,。

       產品涉及分子生物學,、細胞生物學、遺傳學,、免疫學,、生物化學、蛋白質學等相關產品,。 自研產品和合作研發(fā)產品主要有原代細胞,、細胞株、ELSIA試劑盒,、蛋白,、抗體、感受態(tài)細胞和分子類試劑盒,。

原代細胞,、細胞株、ELSIA試劑盒,、蛋白,、抗體、感受態(tài)細胞和分子類試劑盒

,、永生化小鼠腎足突細胞簡介:

雖然原代小鼠腎足突細胞更能真實地反映腎足突細胞在小鼠體內的生理狀態(tài),,但是一方面原代分離培養(yǎng)小鼠腎足突細胞周期長及對技術人員經驗要求非常高,另一方面此原代細胞在體外培養(yǎng)生長緩慢,,不能傳代,,這些不利因素制約了原代小鼠腎足突細胞在實驗室的廣泛應用。我公司的研究團隊擁有多年原代細胞分離培養(yǎng)及細胞永生化服務研究經驗,,成功建立了永生化小鼠腎足突細胞,。
腎足突細胞是附著在腎小球基底膜外的高度分化的上皮細胞。足細胞之間鄰近的足突相互交替,,形成了許多30~40nm的裂孔,,孔上覆蓋一層厚4~6 nm的裂孔隔膜, 即腎小球足突間裂孔隔膜。后者是血漿蛋白通過脈管系統(tǒng)的最后屏障,,對于維持腎小球濾過屏障結構與功能完整性發(fā)揮關鍵作用,。
本公司生產的永生化小鼠腎足突細胞采用酶解法和基因轉染制備而來,細胞總量約為1×106/T25方瓶,,細胞純度可達90%以上,,且不含有HIV-1,、 HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
二,、 使用方法

1 您收到細胞后,,請按照以下方法進行操作:

取出 T25 方瓶,, 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,,放入 37 , 5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時,, 以穩(wěn)定細胞狀態(tài),然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細胞的培養(yǎng)液(備注: 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細胞,, 保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細胞生長,,以免使用自己培養(yǎng)液不適合細胞生長造成細胞狀態(tài)不好或死亡 最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養(yǎng),。
2 ,、細胞傳代:
1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時,棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,, PBS 清洗細胞 3 次,;
2)添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,倒置顯微鏡下觀察,,待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,用滴管混勻并將懸液轉移至 15ml 離心管中,,1000rpm/min,,離心 5min
3)棄上清,,沉淀細胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸,,然后按 1:2 比例進行分瓶傳代, 最后放入 37 ,5%CO2 胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
4)待細胞貼壁后,, 觀察培養(yǎng)結果,之后進行換液培養(yǎng)或傳代,。
3 ,、細胞凍存
1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時,棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,,用 PBS 清洗細胞 3 次,;
2)添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,,倒置顯微鏡下觀察,待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,,用滴管混勻并將懸液轉移至 15ml 離心管中,,1000rpm/min,離心 5min,;
3)用適當量的凍存液(培養(yǎng)液: FBSDMSO=7:2:1)重懸細胞,,并放置于凍存管中;
4)先將細胞凍存管放置于-20 1h,,然后將其移入-80℃過夜,, 24h 后轉入液氮中進行長期儲存(或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉移液氮中長期儲存)。
4,、細胞復蘇:
1)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具 ,,快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結晶,,然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁,;
2)將凍存管中的細胞轉移至含 5ml 培養(yǎng)液無菌離心管中,1000rpm 離心 5min ,,然后加入 5ml 全培養(yǎng)液混勻細胞,, 將細胞懸液轉移至 T25 培養(yǎng)瓶中, 放置于 37 , 5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
3
第二天,,換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。


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