小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞（永生化）
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- 公司名稱 上海富雨生物科技有限公司
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- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/2/12 13:47:12
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一,、永生化小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞簡介：
雖然原代小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞更能真實(shí)地反映膀胱平滑肌細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的生理狀態(tài)，但是一方面原代分離培養(yǎng)小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞周期長及對技術(shù)人員經(jīng)驗(yàn)要求非常高，另一方面此原代細(xì)胞在體外培養(yǎng)生長緩慢,，不能多次傳代,，這些不利因素制約了原代小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)室的廣泛應(yīng)用。我公司的研究團(tuán)隊(duì)擁有多年原代細(xì)胞分離培養(yǎng)及細(xì)胞永生化服務(wù)研究經(jīng)驗(yàn),，成功建立了永生化小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞,。膀胱壁由三層組織組成，由內(nèi)外為粘膜層,、肌層和外膜,。其中，肌層由平滑肌構(gòu)成,。體外培養(yǎng)膀胱平滑肌細(xì)胞不僅為組織工程膀胱,，尿道提供種植細(xì)胞的必要手段，也是研究平滑肌瘤的基礎(chǔ)與前提,。
本公司生產(chǎn)的永生化小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞采用酶解法和基因轉(zhuǎn)染制備而來,，細(xì)胞總量約為1×106/T25方瓶，細(xì)胞純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、 HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
二,、 使用方法
1 、您收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進(jìn)行操作：
取出 T25 方瓶,， 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜,，放入 37℃ , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時(shí),， 以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),，然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細(xì)胞的培養(yǎng)液（備注： 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細(xì)胞,， 保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細(xì)胞生長,，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細(xì)胞生長造成細(xì)胞狀態(tài)不好或死亡） ，最后按照后面細(xì)胞傳代步驟進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng),。
2 ,、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí)，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,， 用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次,；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min，離心 5min,；
3）棄上清,，沉淀細(xì)胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代,， 最后放入 37℃ ,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
4）待細(xì)胞貼壁后， 觀察培養(yǎng)結(jié)果,，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3 ,、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí),，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次,；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min，離心 5min,；
3）用適當(dāng)量的凍存液（培養(yǎng)液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細(xì)胞,，并放置于凍存管中；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1h,，然后將其移入-80℃過夜,， 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期儲(chǔ)存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長期儲(chǔ)存）。
4,、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具） ,，快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結(jié)晶,，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁,；
3）第二天,，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。
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