小鼠氣管平滑肌細胞（原代）
具體成交價以合同協(xié)議為準
- 公司名稱 上海富雨生物科技有限公司
- 品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/2/12 13:43:46
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一,、小鼠氣管平滑肌細胞簡介
哮喘是一種常見的氣道慢性炎癥性疾病,，目前我國有約 2000萬人罹患哮喘。近些年,，由于霧霾等空氣質(zhì)量與環(huán)境污染程度的日益惡劣,，呼吸系統(tǒng)疾病也逐漸成為了范圍影響人類健康最嚴重的慢性疾病之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織預測,，到2025年,，世界上將會有 4 億人患上哮喘。哮喘發(fā) 病 癥 狀 眾 多,，早 期 表 現(xiàn) 為 過 敏 性 炎癥,，后期由于氣管平滑肌增生，阻塞氣管,，導致氣道狹窄,、氣道高反應及氣道重塑，患者出現(xiàn)胸悶,、氣喘等癥狀,，嚴重時危及生命。因此,，對哮喘的發(fā)病機理與治療的研究是至關重要的,。在對哮喘發(fā)病機制的研究中，氣管平滑肌是針對氣道阻塞性癥狀的主要研究目標之一,，針對氣管平滑肌細胞的形態(tài)學觀察與細胞增殖速率的測量是在細胞生物學水平研究哮喘發(fā)病機制的常用手段,。本公司生產(chǎn)的小鼠氣管平滑肌細胞采用酶解法制備而來，細胞總量約為5×105/T25方瓶，細胞純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、 HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
二、 使用方法
1 ,、您收到細胞后,，請按照以下方法進行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,，拆下封口膜,，放入 37℃ , 5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時， 以穩(wěn)定細胞狀態(tài),，然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細胞的培養(yǎng)液（備注： 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細胞,， 保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細胞生長，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細胞生長造成細胞狀態(tài)不好或死亡） ,，最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養(yǎng),。
2 、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時,，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,， 用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察,，待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min,，離心 5min；
3）棄上清,，沉淀細胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸,，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代， 最后放入 37℃ ,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
4）待細胞貼壁后,， 觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代,。
3 ,、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞 3 次,；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min，離心 5min,；
3）用適當量的凍存液（培養(yǎng)液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞,，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1h,，然后將其移入-80℃過夜,， 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長期儲存）。
4,、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具） ,，快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結(jié)晶,，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁,；
3）第二天,，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
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