小鼠氣管上皮細(xì)胞（原代）
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- 公司名稱(chēng) 上海富雨生物科技有限公司
- 品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/2/12 13:35:00
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一,、小鼠氣管上皮細(xì)胞簡(jiǎn)介
氣管管壁由粘膜,、黏膜下層和外膜三層組成，粘膜表面為假?gòu)?fù)層纖毛柱狀上皮,，由纖毛細(xì)胞,、杯狀細(xì)胞、基底細(xì)胞,、刷狀細(xì)胞和彌漫性神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞組成,。纖毛細(xì)胞呈柱狀，游離面有纖毛,，每個(gè)細(xì)胞約有300根,，核卵圓形，位于細(xì)胞中部,。粘液纖毛裝置：氣管到細(xì)支氣管粘膜表面有粘液纖毛裝置,，其內(nèi)層是稀薄漿液，稱(chēng)漿液層,，外層是呈間斷滴狀的粘液,，稱(chēng)粘強(qiáng)力層。粘液纖毛裝置具有防御功能,，粘液捕獲的灰塵,、細(xì)菌等可由有規(guī)律擺動(dòng)的纖毛推至喉部清除出去。本公司生產(chǎn)的小鼠氣管上皮細(xì)胞采用酶解法制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×105/T25方瓶,，細(xì)胞純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、 HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
二,、 使用方法
1 ,、您收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,，拆下封口膜,，放入 37℃ , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時(shí)， 以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),，然后打開(kāi)瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細(xì)胞的培養(yǎng)液（備注： 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細(xì)胞,， 保存種子后再?lài)L試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細(xì)胞生長(zhǎng)，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細(xì)胞生長(zhǎng)造成細(xì)胞狀態(tài)不好或死亡） ,，最后按照后面細(xì)胞傳代步驟進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng),。
2 、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí),，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,， 用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min,，離心 5min；
3）棄上清,，沉淀細(xì)胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸,，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代， 最后放入 37℃ ,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
4）待細(xì)胞貼壁后,， 觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代,。
3 、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí),，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,，用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min,，離心 5min；
3）用適當(dāng)量的凍存液（培養(yǎng)液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細(xì)胞,，并放置于凍存管中,；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1h，然后將其移入-80℃過(guò)夜， 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期儲(chǔ)存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存）,。
4,、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具） ，快速將其置入 37℃水浴中解凍,， 直至凍存管中無(wú)結(jié)晶,，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；
3）第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。
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