大鼠胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞（原代）
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 上海富雨生物科技有限公司
- 品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/2/12 13:27:58
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一,、大鼠胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞簡介：
在胚胎發(fā)育成桑椹胚后,，桑椹胚進一步發(fā)育，細(xì)胞開始出現(xiàn)分化,。聚集在胚胎的一端,，個體較大的細(xì)胞，稱為內(nèi)細(xì)胞團（inner cell mass，ICM）,，內(nèi)細(xì)胞團的細(xì)胞是胚胎干細(xì)胞是一種未分化的細(xì)胞,，具有發(fā)育性，將來發(fā)育成胎兒的各種組織,，而沿透明帶內(nèi)壁擴展和排列的,，個體較小的細(xì)胞，稱為滋養(yǎng)層細(xì)胞,，它們將來發(fā)育成胎膜和胎盤,。 所以做基因診斷時，通常取少量滋養(yǎng)層細(xì)胞診斷是否患有遺傳病,，這樣不會影響胎兒發(fā)育,。本公司生產(chǎn)的大鼠胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞采用密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為5×105/T25方瓶,，細(xì)胞純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、 HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
二、 使用方法
1 ,、您收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,，拆下封口膜,，放入 37℃ , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時， 以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),，然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細(xì)胞的培養(yǎng)液（備注： 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細(xì)胞,， 保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細(xì)胞生長，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細(xì)胞生長造成細(xì)胞狀態(tài)不好或死亡） ,，最后按照后面細(xì)胞傳代步驟進行細(xì)胞傳代培養(yǎng),。
2 、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時,，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液， 用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次,；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min,，離心 5min；
3）棄上清,，沉淀細(xì)胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸,，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代， 最后放入 37℃ ,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
4）待細(xì)胞貼壁后,， 觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代,。
3 ,、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,，用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次,；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm/min,，離心 5min,；
3）用適當(dāng)量的凍存液（培養(yǎng)液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中,；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1h,，然后將其移入-80℃過夜， 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長期儲存）,。
4,、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具） ，快速將其置入 37℃水浴中解凍,， 直至凍存管中無結(jié)晶,，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；
3）第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。
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