小鼠II型肺泡上皮細胞（原代）
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- 公司名稱 上海富雨生物科技有限公司
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- 型號
- 產地
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2025/2/12 13:08:05
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一、小鼠II型肺泡上皮細胞簡介
肺泡上皮細胞又稱顆粒肺泡細胞,，包括Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮細胞,，其中Ⅱ型散在分布于Ⅰ型肺泡細胞之間及其相鄰的肺泡間隔結合處。其體積較小,，呈立方形,，表面稍突向肺泡腔。其是肺泡上皮細胞的“干細胞”,，它的功能多樣：能增殖成新的Ⅱ型肺泡上皮細胞,，還可以分化為其他上細胞如Ⅰ型肺泡細胞；合成和分泌表面活性物質的功能,；肺水轉運功能,；強大的免疫功能。這些功能與以下疾病有密不可分的關系,。本公司生產的小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞采用體外灌注和密度梯度離心法制備而來,，細胞總量約為5×105/T25方瓶，CK-18,、CK-19免疫熒光染色呈陽性,，細胞純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、 HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
二、 使用方法
1 ,、您收到細胞后,，請按照以下方法進行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,，拆下封口膜,，放入 37℃ , 5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時， 以穩(wěn)定細胞狀態(tài),，然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細胞的培養(yǎng)液（備注： 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細胞,， 保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細胞生長，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細胞生長造成細胞狀態(tài)不好或死亡） ,，最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養(yǎng),。
2 、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時,，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,， 用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察,，待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min,，離心 5min,；
3）棄上清,，沉淀細胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸,，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代,， 最后放入 37℃ ,5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
4）待細胞貼壁后,， 觀察培養(yǎng)結果,，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
3 ,、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,，用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察,，待細胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min,，離心 5min；
3）用適當量的凍存液（培養(yǎng)液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞,，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1h，然后將其移入-80℃過夜,， 24h 后轉入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉移液氮中長期儲存）,。
4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具） ,，快速將其置入 37℃水浴中解凍,， 直至凍存管中無結晶,，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；
3）第二天,，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
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