小鼠氣道平滑肌細(xì)胞（原代）
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- 公司名稱 上海富雨生物科技有限公司
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- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/2/12 13:06:52
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一,、小鼠氣道平滑肌細(xì)胞簡介
氣道平滑肌是維持氣道張力的根本。氣道平滑肌特異的超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和調(diào)節(jié)機(jī)制是實(shí)現(xiàn)氣管正常生理功能的基礎(chǔ),。氣道平滑肌細(xì)胞增殖已成為人們關(guān)注的焦點(diǎn),，因?yàn)樵谙∪酥校摷?xì)胞是氣管壁重塑反應(yīng)中數(shù)量上的重要組分,，并被認(rèn)為是新型抗哮喘病藥物的作用目標(biāo),。在體外培養(yǎng)中，氣道平滑肌細(xì)胞能表達(dá)CT－1,，并釋放GM-CSF, RANTES和IL-8,。為研制抗氣道重塑藥物，研究者們利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)研究支氣管平滑肌細(xì)胞增殖的細(xì)胞和分子機(jī)理,，并探尋調(diào)控細(xì)胞生長的關(guān)鍵細(xì)胞周期事件,。本公司生產(chǎn)的小鼠氣道平滑肌細(xì)胞采用酶解法制備而來，細(xì)胞總量約為5×105/T25方瓶,，α-SMA,、Desmin免疫熒光染色呈陽性，細(xì)胞純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、 HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
二,、 使用方法
1 、您收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進(jìn)行操作：
取出 T25 方瓶,， 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜,，放入 37℃ , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時(shí),， 以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),，然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細(xì)胞的培養(yǎng)液（備注： 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細(xì)胞， 保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細(xì)胞生長,，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細(xì)胞生長造成細(xì)胞狀態(tài)不好或死亡） ,，最后按照后面細(xì)胞傳代步驟進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
2 ,、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí),，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液， 用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次,；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min，離心 5min,；
3）棄上清,，沉淀細(xì)胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代,， 最后放入 37℃ ,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
4）待細(xì)胞貼壁后， 觀察培養(yǎng)結(jié)果,，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代,。
3 、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí),，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,，用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min,，離心 5min；
3）用適當(dāng)量的凍存液（培養(yǎng)液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細(xì)胞,，并放置于凍存管中；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1h,，然后將其移入-80℃過夜,， 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期儲(chǔ)存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長期儲(chǔ)存）。
4,、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具） ,，快速將其置入 37℃水浴中解凍,， 直至凍存管中無結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁,；
3）第二天,，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。
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