人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（永生化）
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- 公司名稱 上海富雨生物科技有限公司
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- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/2/12 12:50:49
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一,、永生化人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞簡介：
雖然原代人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞最更能真實(shí)地反映骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在人體內(nèi)的生理狀態(tài)，但是一方面原代分離培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞周期長及對(duì)技術(shù)人員經(jīng)驗(yàn)要求較高,，另一方面此原代細(xì)胞在體外的生長增殖能力非常緩慢有限,，以至于此細(xì)胞不能多次傳代，這些不利因素制約了原代人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)室的廣泛應(yīng)用,。我公司的研究團(tuán)隊(duì)擁有多年原代細(xì)胞分離培養(yǎng)及細(xì)胞永生化服務(wù)研究經(jīng)驗(yàn),，成功建立了永生化人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是干細(xì)胞家族的重要成員,，來源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層,。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞最初在骨髓中發(fā)現(xiàn)，因其具有多向分化潛能,、造血支持和促進(jìn)干細(xì)胞植入,、免疫調(diào)控和自我復(fù)制等特點(diǎn)而日益受到人們的關(guān)注。如間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)或體外特定的誘導(dǎo)條件下,，可分化為脂肪,、骨、軟骨,、肌肉,、肌腱,、韌帶、神經(jīng),、 肝,、心肌、內(nèi)皮等多種組織細(xì)胞,，連續(xù)傳代培養(yǎng)和冷凍保存后仍具有多向分化潛能,，可作為理想的種子細(xì)胞用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復(fù)。
本公司生產(chǎn)的永生化人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞采用密度梯度離心及基因轉(zhuǎn)染制備而來,，細(xì)胞總量約為1×106/T25方瓶,，細(xì)胞純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、 HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
二,、 使用方法
1 ,、您收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：
取出 T25 方瓶,， 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時(shí),， 以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),，然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細(xì)胞的培養(yǎng)液（備注： 先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細(xì)胞， 保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細(xì)胞生長,，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細(xì)胞生長造成細(xì)胞狀態(tài)不好或死亡） ,，最后按照后面細(xì)胞傳代步驟進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
2 ,、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí),，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液， 用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次,；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化,，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min，離心 5min；
3）棄上清,，沉淀細(xì)胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸,，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代， 最后放入 37℃ ,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
4）待細(xì)胞貼壁后， 觀察培養(yǎng)結(jié)果,，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代,。
3 、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí),，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液,，用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘,，倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,，1000rpm/min,，離心 5min；
3）用適當(dāng)量的凍存液（培養(yǎng)液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細(xì)胞,，并放置于凍存管中,；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1h，然后將其移入-80℃過夜,， 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期儲(chǔ)存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長期儲(chǔ)存）,。
4、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具） ,，快速將其置入 37℃水浴中解凍,， 直至凍存管中無結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁,；
3）第二天,，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。
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