細(xì)胞名稱：小鼠食管癌細(xì)胞AKRATCC細(xì)胞

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)）

細(xì)胞凍存：無(wú)血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

1、您收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶,，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜,，放入37℃,，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。

2,、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min,；

3）棄上清,，沉淀細(xì)胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代,，zui后放入37℃,，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細(xì)胞*貼壁后,，觀察培養(yǎng)結(jié)果,，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。

3,、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min,；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞,，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,，然后將其移入-80℃過(guò)夜,，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃,。

4,、細(xì)胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍,，直至凍存管中無(wú)結(jié)晶,，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁,；

2）將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min,；

3）棄上清,，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶,，于37℃,，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天,，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。

1、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別,？倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)加倍,，通常是指細(xì)胞指數(shù)或?qū)?shù)生長(zhǎng)期。代數(shù)是指細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中移出,，傳代培養(yǎng)過(guò)程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的是使細(xì)胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長(zhǎng),。

2,、接收到的凍存細(xì)胞該如何處理？收到包裝箱后,，立即將凍存細(xì)胞從干冰移入液氮中凍存,。此過(guò)程盡量快以避免升溫。不要將細(xì)胞儲(chǔ)存在-80℃,，這樣會(huì)對(duì)細(xì)胞造成不可挽回的傷害,。

3、有多少經(jīng)驗(yàn)才能開(kāi)始正常人類細(xì)胞培養(yǎng),？推薦有經(jīng)驗(yàn)者在無(wú)菌環(huán)境下用層流凈化罩工作,，如果有經(jīng)驗(yàn)的話對(duì)其它細(xì)胞類型也是很有利的。如果你是細(xì)胞培養(yǎng)的初學(xué)者或打算建立細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室,，我們會(huì)為你提供幫助,。請(qǐng)的細(xì)胞培養(yǎng)專家。

售后服務(wù)告知書

1）細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,，可重發(fā)的情況有哪些,？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？

1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題,，細(xì)胞丟失,、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,，重發(fā),；

2. 細(xì)胞污染問(wèn)題,，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品48小時(shí)內(nèi)，給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，核實(shí)后重發(fā),；

3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后,，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,，（需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片），重發(fā),；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)候并且未開(kāi)封,，出現(xiàn)污染，重發(fā),；

5. 細(xì)胞活性問(wèn)題,，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,，核實(shí)后予重發(fā),；

6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請(qǐng)拍照，3天未告知的,，視為產(chǎn)品合格,。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問(wèn)題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的,，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價(jià)的50%收費(fèi)重發(fā),。

二）細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,，不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細(xì)胞污染,，不重發(fā),；

2. 客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā),；

3. 非本庫(kù)推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)；

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,，不重發(fā)；

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的,，不重發(fā),；

6. 細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā),；

7. 視具體情況而定,。

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