Proteintech  PF00004  CCK-8試劑盒

Proteintech CCK-8試劑盒-常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號：PF00004

產(chǎn)品名稱：CCK-8試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：500T

產(chǎn)品簡介：

Cell Counting kit-8 簡稱 CCK8(或WST-8)試劑盒,，是一種基于 WST-8（化學(xué)名：2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2，4- 二磺基苯）-2H- 四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

產(chǎn)品說明：

WST-8工作原理：在電子耦合試劑存在的情況下,，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）。顏色的深淺與細胞的增殖成正比,，與細胞毒性成反比,。使用酶標儀在 450 nm 波長處測定 OD 值，間接反映活細胞數(shù)量,。

WST-8 是 MTT 的一種升級替代產(chǎn)品,，和 MTT 或其它 MTT 類似產(chǎn)品如 XTT、MTS 等相比有明顯的優(yōu)點,。首先,，MTT 被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的 formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解,；而 WST-8 和 XTT,、MTS 產(chǎn)生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟,。其次,，WST-8 產(chǎn)生的 formazan 比 XTT 和 MTS 產(chǎn)生的 formazan 相比更易溶解。再次,，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加穩(wěn)定,，使實驗結(jié)果更加穩(wěn)定,。另外，WST-8 和 MTT ,、XTT 等相比線性范圍更寬,，靈敏度更高。CCK-8 法應(yīng)用非常廣泛,，如藥物篩選,、細胞增殖測定、細胞毒性測定,、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等,。

保存條件

4℃避光保存1年有效，-20℃避光保存2年有效,。

使用方法

1.制作標準曲線（測定細胞具體數(shù)量時）

1）先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量,，然后接種細胞。

2）按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,，一般要做 3-5 個細胞濃度梯度,，每組 3-6 個復(fù)孔。

3）接種后培養(yǎng) 2-4 h 使細胞貼壁,，然后加 CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時間后測定 OD 值,，制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標，OD值為縱坐標的標準曲線,，根據(jù)此標準線可以測定未知樣品的細胞數(shù)量（使用此標準曲線的前提條件是實驗條件一致,，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入 CCK-8 后的培養(yǎng)時間）。

2.細胞活性檢測

1）在 96 孔板中接種細胞懸液（100 uL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37 ℃, 5% CO2 ）,。

2）向每孔加入 10 uL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡， 它們會影響 OD 值的讀數(shù)）,。

3）將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 h,。

4）用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。

5）若暫時不測定 OD 值,，可以向每孔中加入 10 uL 0.1 M 的HCl溶液或者1% w/v SDS 溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24 h 內(nèi)測定,，吸光度不會發(fā)生變化。

3.細胞增殖毒性檢測

1）在 96 孔板中配置 100 uL的細胞懸液,。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 h （37 ℃,，5% CO2 ）。

2）向培養(yǎng)板加入 1-10 uL 不同濃度的待測物質(zhì),。

3）將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間（例如：6,、12,、24 或 48 h）。

4）向每孔加入 10 uL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會影響 OD 值的讀數(shù)）,。

5）將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 h。

6）用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度,。

7）若暫時不測定 OD 值,，可以向每孔中加入 10 uL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24 h 內(nèi)測定,，吸光度不會發(fā)生變化。

注：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性,，可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基,，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基）,，去掉藥物影響,。若藥物影響比較小，可以不更換培養(yǎng)基,，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可,。

注意

1.第一次做實驗時，建議先做幾個孔摸索接種細胞的數(shù)量和加入 CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時間,。

2.接種時注意細胞懸液一定要混勻,，以避免細胞沉淀下來，導(dǎo)致每孔中的細胞數(shù)量不一致,。

3.培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā),，為減少誤差，建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基,。

4.建議采用多通道移液器,，減少平行孔間的誤差，加 CCK-8 時,，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加,，若插到培養(yǎng)基液面下加，容易產(chǎn)生氣泡,， 干擾 OD 值,。

5.若細胞培養(yǎng)時間較長，培養(yǎng)基顏色或 pH 發(fā)生變化,，建議更換培養(yǎng)基后再加 CCK-8,，含有酚紅的培養(yǎng)基不影響測定。

6.CCK-8 對細胞的毒性非常低,，其他的實驗,，例如中性紅法或結(jié)晶紫法 ,，也可在 CCK-8 法檢測完后繼續(xù)進行。

7.可以使用大于 600 nm 的波長,，例如 650 nm ,，作為參考波長進行雙波長測定，CCK-8 在參考波長處沒有吸光值,，設(shè)定參考波長的目的是為了去除由于樣品渾濁所帶來的吸收,。

8.如果實驗中待測物質(zhì)有氧化還原劑，在不含細胞的培養(yǎng)基中加入藥物,，然后加入 CCK-8 試劑在一定時間內(nèi)檢測,，和不加藥物的培養(yǎng)基進行比較（只加 CCK-8 試劑），如果 OD 值明顯偏高,，則說明有反應(yīng),。

9.加 CCK-8 試劑時速度要快，減少試劑在移液器上的殘留,，加入 CCK-8 試劑后輕震培養(yǎng)板,，為了避免加樣時由于 CCK-8 殘留在槍頭上所帶來的誤差，可以在加樣前用培養(yǎng)基稀釋 CCK-8 試劑并混勻后加樣,。

10.CCK-8 反復(fù)凍融會增加背景值,，干擾實驗測定。

 Proteintech CCK-8試劑盒-常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品訂購信息

PF00004  CCK-8試劑盒  500T

PF00008 動物活細胞和死細胞的活力/細胞毒性檢測試劑盒(鈣黃綠素AM,，EthD-1方法） 300T