8305C人甲狀腺癌細(xì)胞8305C（未分化）

細(xì)胞介紹

人甲狀腺未分化癌細(xì)胞（anaplastic thyroid carcinoma, ATC）,，未分化。從一名67歲女性患者的未分化甲狀腺癌建立,。在病理學(xué)上,，該癌組織含有殘留的高分化成分，表明高分化至未分化癌的進(jìn)程,。據(jù)報道,，抑癌基因p53、Rb,、APC和MCC的序列分析證實(shí)了p53基因第273密碼子的第一個堿基發(fā)生了C:G到T:A的轉(zhuǎn)變,。未觀察到抑癌基因雜合性的缺失。

細(xì)胞特性

1） 來源：人  甲狀腺

2） 形態(tài)：上皮樣,，貼壁生長

3） 含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用,。

8305C人甲狀腺癌細(xì)胞8305C（未分化）

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系,。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。

細(xì)胞接收后的處理

1）收到細(xì)胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況,。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL,，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理,。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收,。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備MEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基                           87%

       優(yōu)質(zhì)胎牛血清                                         10 %

       GlutaMAX-1                           1%

        MEM NEAA非必需氨基酸                       1%

         P/S                      1%

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二．細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。 

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗使用,。

下面T25瓶為例,；

1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù),，來決定細(xì)胞的凍存密度,。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清,。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,，標(biāo)注好名稱、代數(shù),、日期等信息,。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜,，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。