8305C人甲狀腺癌細(xì)胞8305C(未分化)
- 公司名稱 上海普依藍(lán)生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
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- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2025/2/11 17:01:03
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×10^6 |
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貨號 | BH0002 | 主要用途 | 僅供科研使用 |
8305C人甲狀腺癌細(xì)胞8305C(未分化)
細(xì)胞介紹
人甲狀腺未分化癌細(xì)胞(anaplastic thyroid carcinoma, ATC),,未分化。從一名67歲女性患者的未分化甲狀腺癌建立,。在病理學(xué)上,,該癌組織含有殘留的高分化成分,表明高分化至未分化癌的進(jìn)程,。據(jù)報道,,抑癌基因p53、Rb,、APC和MCC的序列分析證實(shí)了p53基因第273密碼子的第一個堿基發(fā)生了C:G到T:A的轉(zhuǎn)變,。未觀察到抑癌基因雜合性的缺失。
細(xì)胞特性
1) 來源:人 甲狀腺
2) 形態(tài):上皮樣,,貼壁生長
3) 含量:>1x106 細(xì)胞數(shù)
4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用,。
8305C人甲狀腺癌細(xì)胞8305C(未分化)
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,,請立即與我們聯(lián)系,。
(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。
細(xì)胞接收后的處理
1)收到細(xì)胞后,,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染,,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),,同時給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,,作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況,。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL,,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理,。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收,。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 ,。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備MEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 87%
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 10 %
GlutaMAX-1 1%
MEM NEAA非必需氨基酸 1%
P/S 1%
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細(xì)胞處理:
1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,,培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度,。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,,T75瓶2-3mL),,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。
3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗使用,。
下面T25瓶為例,;
1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),,來決定細(xì)胞的凍存密度,。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細(xì)胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清,。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,,標(biāo)注好名稱、代數(shù),、日期等信息,。
3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。