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22RV1人前列腺癌細胞(STR鑒定)

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前列腺上皮樣貼壁細胞

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細胞系,、原代細胞、基礎培養(yǎng)基,,專業(yè)培養(yǎng)基,,胎牛血清,胰酶,,雙抗等等,。

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 1×10^6
貨號 BH0004 主要用途 僅供科研使用

22RV1人前列腺癌細胞(STR鑒定)

細胞描述

前列腺癌細胞,該細胞能產(chǎn)生逆轉錄病毒需要在生物安全等級2級的實驗室環(huán)境中操作細胞,。22RV1細胞表達前列腺特異抗原PSA。二羥基睪丸脂酮可輕微刺激細胞生長,,經(jīng)western blot檢測溶解產(chǎn)物與雄激素受體抗體起免疫反應,。EGF可刺激細胞生長,,但TGF-β1不能抑制細胞生長。近期證實22RV1可生產(chǎn)高滴度的人逆轉錄病毒XMRV,。在裸鼠體內(nèi)可成瘤,。
細胞特性
1) 來源:前列腺
2) 含量:>1x106  細胞數(shù) 
3) 形態(tài):上皮樣,貼壁細胞
4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5)用途:僅供科研使用,。

22RV1人前列腺癌細胞(STR鑒定)

 運輸和保存:干冰運輸及復蘇好存活細胞:(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系,。(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理:
1)收到細胞后,,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,,請拍照后及時聯(lián)系我們,。 
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10×,,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細胞生長密度達70%-80%以上,,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收,。
4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 ,。                       
    一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備RPMI-1640培養(yǎng)基           87%
優(yōu)質(zhì)胎牛血清                      10%
GlutaMAX-1             1%
Sodium Pyruvate丙酮酸鈉              1%
P/S               1%
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%,。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3) 凍存液:90%血清,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,。
二. 細胞處理:
1) 凍存細胞的復蘇::
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,,棄去上清液,,培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度,。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2. 加入0.25%(w / v)-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。 
3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。下面T25瓶為例,;
1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),,來決定細胞的凍存密度,。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,,標注好名稱,、代數(shù),、日期等信息。
3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,,-80度冰箱中過夜,,之后轉入液氮容器中儲存。同時記




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