293T人胚腎細胞(STR鑒定)
- 公司名稱 上海普依藍生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
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- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2025/2/11 17:01:03
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×10^6 |
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貨號 | BH0005 | 主要用途 | 僅供科研使用 |
293T人胚腎細胞(STR鑒定)
細胞介紹
HEK-293T細胞是293T(293tsA1609neo)細胞系(ATCC CRL-11268)的衍生物,。細胞持續(xù)表達SV40抗原,該細胞常用于轉(zhuǎn)染實驗,,轉(zhuǎn)染效率較高,。(轉(zhuǎn)染一般以50%密度鋪板,待細胞剛剛貼到皿壁上后(一般8-10小時),,即可進行轉(zhuǎn)染操作)
細胞特性
1) 來源:人胚胎腎臟
2) 形態(tài):上皮細胞樣,,貼壁生長,貼壁能力較弱
3) 含量:>1x106 細胞數(shù)
4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用,。
293T人胚腎細胞(STR鑒定)
運輸和保存:干冰運輸及復蘇好存活細胞:(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇,,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染,,請立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,,收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。
細胞接收后的處理:
1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們,。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù),。
3)半貼細胞和貼壁不牢(懸浮)細胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,,顯微鏡下觀察細胞的情況,若細胞密度在60%以下,,客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),,若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代,傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收,。
4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 ,。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM培養(yǎng)基,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,;L-(2mM)1%,;NEAA 1% ; 雙抗 1%
注意:1.該細胞貼壁能力較弱,,培養(yǎng)時可酌情使用預鋪0.2%明膠的培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿,。培養(yǎng)液中需添加熱滅活胎牛血清。細胞生長不能過密,,過密細胞容易脫落,,脫落下來的細胞可以通過離心收集,使用0.05% Trypsin-0.53 mM EDTA 消化后繼續(xù)培養(yǎng),。
2.如果發(fā)生293T細胞不貼壁,,漂浮在培養(yǎng)基中的現(xiàn)象,請確認所使用的DMEM中濃度及培養(yǎng)箱中CO2濃度。并參考以下培養(yǎng)體系:
a) DMEM由1.5 g/L配制而成,,使用5%CO2培養(yǎng)箱,。
b) DMEM由3.7 g/L配制而成,使用10%CO2培養(yǎng)箱,。
當使用含量高的培養(yǎng)基時,,必須將這些細胞在10%CO2中孵育,以便正確緩沖培養(yǎng)基,。當培養(yǎng)基沒有適當緩沖時,,239T細胞雖然可以存活,但將無法粘附并保持漂浮在培養(yǎng)基中,。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3) 凍存液:90%FBS,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,。
二. 細胞處理:
1)凍存細胞的復蘇:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,,棄去上清液,,培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度,。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達70%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞,,傳代可以參考以下方法:
1. 收集:將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。
2. 加入0.25%(w / v)-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,,T75瓶2-3mL)置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。
3. 將收集到的懸浮細胞,、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min,棄去上清,,補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行,。
3) 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。下面T25瓶為例;
1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,,可使用血球計數(shù)板計數(shù),,來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min,,去掉上清,。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,,標注好名稱,、代數(shù)、日期等信息,。
3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。
注意事項:
1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。
2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套,、衣服和戴上防護面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會泄漏,,并會慢慢充滿液氮,。解凍時,液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,,從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害,。