A3人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞(STR鑒定)
- 公司名稱 上海普依藍(lán)生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2025/2/11 17:01:03
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×10^6 |
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貨號 | BH0014 | 主要用途 | 僅供科研使用 |
A3人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞(STR鑒定)
細(xì)胞描述
A3亞克隆來自Jurkat細(xì)胞系,。 用Fas抗體處理Jurkat細(xì)胞,用有限稀釋法獲得一個(gè)細(xì)胞系,,此細(xì)胞系對Fas介導(dǎo)的凋亡產(chǎn)生自發(fā)抗性的比例較低,。 得到的亞克隆對Fas-介導(dǎo)的凋亡十分敏感。 挑選對具有抗性的野生型A3細(xì)胞,,并三次用移碼突變誘變劑ICR-191進(jìn)行處理以分離具有抗Fas抗體殺傷的隱性突變體,。
細(xì)胞特性
1) 來源:T淋巴細(xì)胞;T細(xì)胞白血病
2) 形態(tài):淋巴母細(xì)胞,懸浮生長
3) 含量:>1x106細(xì)胞數(shù)
4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用。
A3人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞(STR鑒定)
運(yùn)輸和保存:干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞:(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染,,請立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。
細(xì)胞接收后的處理:
1) 收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們,。
2)請?jiān)?/span>4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),,同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。
3) 懸浮細(xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基),。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 ,。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備 1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%,P/S 1%
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,。
二. 細(xì)胞處理:
1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,,棄去上清液,,培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度,。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
懸浮狀態(tài)下生長的細(xì)胞,,可以通過向培養(yǎng)瓶中添加培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長狀態(tài),一般情況下細(xì)胞密度維持在1×105~1×106個(gè)/mL(不同細(xì)胞對密度要求不同,,)可以維持細(xì)胞的正常生長,。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm,離心5min,,棄去上清,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行,。
3) 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例,;
1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度,。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min,,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,,按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,,標(biāo)注好名稱、代數(shù),、日期等信息,。
3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存,。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項(xiàng):
1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。
2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套,、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會泄漏,,并會慢慢充滿液氮,。解凍時(shí),液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子,從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害,。