A431(A-431)人表皮癌細胞(STR鑒定)
- 公司名稱 上海普依藍生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
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- 產地
- 廠商性質 經銷商
- 更新時間 2025/2/11 17:01:03
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供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 1×10^6 |
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貨號 | BH0017 | 主要用途 | 僅供科研使用 |
A431(A-431)人表皮癌細胞(STR鑒定)
細胞介紹
皮膚癌細胞株A-431源自一位85歲女性,,是D.J.Giard等人建立的一系列細胞株中的一株,。它在抗胸腺細胞球蛋白、血清處理的NIH 瑞士小鼠中形成類似于惡性黑素瘤的快速增長的皮下腫瘤,,在普通成纖維細胞和瓊脂上形成克隆,。這是一個超三倍體人細胞株。
細胞特性
1) 來源:皮膚
2) 形態(tài):上皮細胞樣,,貼壁生長
3) 含量:>1x106 細胞數
4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5)用途:僅供科研使用,。
A431(A-431)人表皮癌細胞(STR鑒定)
運輸和保存:干冰運輸及復蘇好存活細胞:(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,,請立即與我們聯系,。(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。
細胞接收后的處理:
1)收到細胞后,,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染,,請拍照后及時聯系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),,同時給剛收到的細胞拍照(10×,,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據,。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況,。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL,,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理,。傳代過程中,,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 ,。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備 DMEM 基礎培養(yǎng)基 87 %
優(yōu)質胎牛血清 10 %
Sodium Pyruvate丙酮酸鈉 1 %
GlutaMAX—1 1%,,
P/S 1%
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3) 凍存液:90%血清,,10%DMSO,現用現配,。
二. 細胞處理:
1) 凍存細胞的復蘇::
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,,棄去上清液,,培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度,。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2. 加入0.25%(w / v)-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。
3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,,后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。下面T25瓶為例,;
1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來決定細胞的凍存密度,。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min,,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,,標注好名稱、代數,、日期等信息,。
3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,,之后轉入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項:
1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,,必須在二級生物安全臺內操作,,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。
2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套,、衣服和戴上防護面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會泄漏,,并會慢慢充滿液氮,。解凍時,液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,,從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害,。