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A549 RFP 人肺癌細(xì)胞RFP(STR鑒定)

具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
產(chǎn)品標(biāo)簽

肺癌 上皮細(xì)胞樣

聯(lián)系方式:孟蕾查看聯(lián)系方式

聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,,謝謝!


 

細(xì)胞系,、原代細(xì)胞,、基礎(chǔ)培養(yǎng)基,專業(yè)培養(yǎng)基,,胎牛血清,,胰酶,雙抗等等,。

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 1×10^6
貨號 BH0020 主要用途 僅供科研使用

A549 RFP 人肺癌細(xì)胞RFP(STR鑒定)

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞系由D.J.Griad通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系,,患者為58歲白人男性。A549能通過胞苷二磷酸途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的,。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶RFP基因,。

細(xì)胞特性

1) 來源:肺癌

2) 形態(tài)上皮細(xì)胞多角形,;貼壁生長

3) 含量:>1x106 細(xì)胞數(shù)

4) 規(guī)格:T25或者1mL凍存管包裝

5) 用途:僅供科研使用,。

A549 RFP 人肺癌細(xì)胞RFP(STR鑒定)

運輸和保存:干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞11mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,,請立即與我們聯(lián)系,。(2T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。

細(xì)胞接收后的處理:

1)收到細(xì)胞后,,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染,,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2)請在45X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),,同時給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,,作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,,有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,,若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收,。

4備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 ,。                      

一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,;雙抗,1%,。

2) 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3) 凍存液90%血清,,10%DMSO現(xiàn)用現(xiàn),。

細(xì)胞處理

1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,,棄去上清液,,培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度,。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子PBS潤洗細(xì)胞1-2

2. 加入0.25%(w / v-0.53 mM EDTA培養(yǎng)瓶中T251-2mL,,T752-3mL置于37培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。 

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM件下離心3-5min,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行

3)細(xì)胞凍存收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用,。下面T25瓶為例,;

1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),,來決定細(xì)胞的凍存密度,。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清,。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱,、代數(shù),、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,,-80度冰箱中過夜,,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。

注意事項:

1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),,所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩,。注意:凍存管浸沒在液氮中會泄漏,,并會慢慢充滿液氮,。解凍時,液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,,從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害,。

 




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