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A549+Luc 人肺癌細(xì)胞Luc (STR鑒定)

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
產(chǎn)品標(biāo)簽

肺癌 上皮細(xì)胞樣

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細(xì)胞系,、原代細(xì)胞,、基礎(chǔ)培養(yǎng)基,專業(yè)培養(yǎng)基,,胎牛血清,,胰酶,雙抗等等,。

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 1×10^6
貨號(hào) BH0021 主要用途 僅供科研使用

A549+Luc 人肺癌細(xì)胞Luc (STR鑒定)

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞系由D.J.Griad通過(guò)肺癌組織移植培養(yǎng)建系,,患者為58歲白人男性。A549能通過(guò)胞苷二磷酸途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的,。

該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因,。

細(xì)胞特性

1) 來(lái)源:肺癌            

2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣,多角形,;貼壁生長(zhǎng)

3) 含量:>1x106細(xì)胞數(shù)        

4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝  

5) 用途:僅供科研使用

細(xì)胞誘導(dǎo)構(gòu)建實(shí)驗(yàn)步驟:

1.  轉(zhuǎn)染  1)將A549細(xì)胞接種6孔板,,每孔細(xì)胞數(shù)約為1×105 個(gè),

2)第二天,,細(xì)胞融合度為50%左右時(shí)用于病毒轉(zhuǎn)染,,

3)加入1mL培養(yǎng)基,再加20 μL Luciferase過(guò)表達(dá)慢病毒,,

4)混勻后繼續(xù)培養(yǎng),,

512h后觀察細(xì)胞狀態(tài),并更換為新鮮培養(yǎng)基,,

6)當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿板底后,,傳代至T25培養(yǎng)瓶中。

2.  篩選:用嘌呤霉素4ug/mL抗性篩選6周,,穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞記作A549+Luc,。

3. 體外熒光素酶活性檢測(cè)

A549細(xì)胞消化,離心,,棄上清,,加20μL細(xì)胞裂解液,再加100μL熒光素酶底物,,檢測(cè)發(fā)光情況,。


發(fā)光值

陰性

105

實(shí)驗(yàn)組

18995

結(jié)果表明慢病毒感染A549細(xì)胞能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶。

A549+Luc 人肺癌細(xì)胞Luc (STR鑒定)

運(yùn)輸和保存:干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞11mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系,。(2T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。

細(xì)胞接收后的處理:

1)收到細(xì)胞后,,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染,,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2)請(qǐng)?jiān)?/span>45X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),,同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。

3貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況,。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL,,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理,。傳代過(guò)程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收,。

4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 ,。                       

一.細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,;雙抗,,1%

2) 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

3) 凍存液90%血清10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn),。

二. 細(xì)胞處理

1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min,,棄去上清液,培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2,。

2. 加入0.25%(w / v-0.53 mM EDTA培養(yǎng)瓶中T251-2mLT752-3mL,,置于37培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺(tái),,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化 

3. 輕輕打勻后吸出,,在1000RPM件下離心3-5min,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細(xì)胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,,添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行,。

3)細(xì)胞凍存收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用,。下面T25瓶為例;

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),,來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,,去掉上清,。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,,標(biāo)注好名稱,、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,,-80度冰箱中過(guò)夜,,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。

注意事項(xiàng):

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),,所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩,。注意:凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏,,并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí),,液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子,,從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。




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