柱式質(zhì)粒提取試劑盒
- 公司名稱 安諾倫（北京）生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時間 2023/12/28 16:11:59
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
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使用步驟
1,、取 5-15 mL 過夜培養(yǎng)菌液加入離心管中,，12000 pm 離心 1 min 收集菌體沉淀，盡量吸棄上清,。
2,、向留有菌體沉淀的離心管中加入 500 uL Buffer P1 (已加入RNase A)，使用移液槍或旋振蕩器充分混勻，懸浮菌體沉淀,，混勻至無菌塊,。
3、向離心管中加入 500 uL Bufcr P2,，溫和上下顛倒混勻 4-6 次,，充分混勻使菌體裂解，此時溶液應(yīng)變得清亮粘稠,。
注意:溫和地混勻,，不要劇烈震蕩，以免打斷基因組 DNA,。所用時間不應(yīng)超過 5 min,，以免質(zhì)粒受到破壞
4、向離心管中加入 700 uL Bufer P3,，立即溫和上下顛倒混勻 8-10 次,，充分混勻，此時應(yīng)
出現(xiàn)白色絮狀沉淀,，12000 rpm 離心 10 min,。注意: P3 加入后立即混合，避免產(chǎn)生局部沉淀,。如果離心完仍有沉淀漂浮,，可延長離心時間取上清。
5,、將步驟 4 中的上清液分批轉(zhuǎn)移到已裝入收集管的吸附柱中,，12000 rpm 離心 1min,，倒掉收集管中的廢液,，將吸附柱重新放回收集管中。注意:一根吸附柱最大容積為 750 uL,，請分兩次轉(zhuǎn)移上清液到吸附柱中,。
6、向吸附柱中加入 500 uL Bufer PD,，12000 rpm 離心 1 min,，棄廢液。
7,、向吸附柱中加入 600 uL Buffer PW (使用前請確認(rèn)是否加入無水乙醇),，12000rpm 離心1 min，棄廢液,。
注意:加入漂洗液 PW 后,，室溫靜置 2-5 min，有助于更好的去除雜質(zhì),。
8,、重復(fù)一次步驟 7,。
9、將吸附柱重新放回收集管中,，12,000 rpm 離心 2 min,，目的是去除吸附柱中殘余的漂洗液。注意:乙醇?xì)埩魰种坪罄m(xù)的酶反應(yīng),，建議將吸附柱開蓋,，置于室溫放置數(shù)分鐘，確保乙醇揮發(fā)干凈,。
10,、將吸附柱放到一個干凈滅菌 1.5 L 離心管中，將吸附柱開蓋靜置數(shù)分鐘,。向吸附膜中間位置懸空滴加 50-100 uL Buffer TE 或 ddHO (可提前放在 5565 C水浴鍋中預(yù)熱,，提高質(zhì)粒 DNA 回收率)，室溫放置 2 min,。12,000 rpm ,，離心 2 min 收集質(zhì)粒 DNA 溶液(若需要獲得最高產(chǎn)量，建議將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,，重復(fù)第 10 步進行二次洗脫,。)。
11,、質(zhì)粒溶液保存在- 20C,。
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