國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒96Tkit

ELISA（酶聯(lián)接免疫吸附反應(yīng)分析）是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù),。 由于抗原,、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種 試劑孵育后,，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性,。

 實(shí)際應(yīng)用中,，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種,。即：用于檢測(cè)抗體的間接法,、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法 以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。目前我們對(duì)客戶(hù)提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù),。

技術(shù)流程

雙抗體夾心法(檢測(cè)未知抗原)

1,、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml,， 4℃ 過(guò)夜,。次日，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次,。

2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔 中,，置37℃ 孵育1小時(shí),。然后洗滌(同時(shí)做空白孔,，陰性對(duì)照孔及 陽(yáng)性對(duì)照孔)。

3,、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴 定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí),，洗滌,。

4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液 0.1ml,，37℃ 10～30分鐘,。

5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml

6,、結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi) 顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,，依據(jù)所呈顏 色的深淺，以“+”,、“-”號(hào)表示,。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上， 于450nm(若以ABTS顯色,，則410nm)處,，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,，即為陽(yáng)性,。

間接法(檢測(cè)未知抗體)

1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml,， 每孔加 0.1ml,，4℃過(guò)夜。次日洗滌3次,。

2,、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述 已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空 白,、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)

3,、加酶標(biāo)抗體：于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二 抗體(抗抗體)0.05ml,，37℃孵育30-60分鐘,，洗滌,zui后 一遍用DDW洗滌。

4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底 物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘,。

5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml

6,、結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果： 反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極 淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”,、“-”號(hào)表示,。也可測(cè)OD 值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色,，則 410nm)處,，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,，即為陽(yáng)性,。

結(jié)果展示：

實(shí)驗(yàn)完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn) ：

1. 實(shí)驗(yàn)周期：1-3天

2. 交付標(biāo)準(zhǔn)：ELISA檢測(cè)原始OD值、ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),、ELISA檢測(cè)目的蛋白濃度值,、柱狀圖、實(shí)驗(yàn)報(bào)告（實(shí)驗(yàn)步驟,、試 劑,、儀器等）

客戶(hù)須知

1、液體類(lèi)標(biāo)本（細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿,、血清、血漿,、尿液、胸水,、腹水,、腦脊液等）；

2,、樣本保存：請(qǐng)盡早檢測(cè),，2-8℃保存一天；需更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20℃或-70℃）保存,。如需周期收集樣本,，請(qǐng)將樣本及時(shí) 分裝標(biāo)號(hào)后，置-20℃或-70℃保存；

3,、請(qǐng)?zhí)崆案嬖V我們：您樣本的種屬,、樣本數(shù)量、待測(cè)指標(biāo)及其他特殊要求,。

報(bào)告內(nèi)容及標(biāo)準(zhǔn)

1,、ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；

2,、詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟,；

3、完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（試劑耗材,，實(shí)驗(yàn)方法,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)果說(shuō)明）。

國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒96Tkit