mRNA免疫抗體制備服務(wù)

近年來隨著mRNA合成,、化學(xué)修飾mRNA和遞送技術(shù)的發(fā)展,，mRNA穩(wěn)定性和翻譯效率大幅提高，免疫原性逐步可控,，其在腫瘤領(lǐng)域顯示了巨大的商業(yè)價值,。mRNA技術(shù)產(chǎn)品是基于mRNA指導(dǎo)蛋白合成的“中心法則”，在體外設(shè)計合成含有編碼特定抗原的mRNA序列,，經(jīng)過序列優(yōu)化,、化學(xué)修飾和純化等加工，采用不同方式遞送至人體細(xì)胞,，利用機(jī)體細(xì)胞翻譯產(chǎn)生蛋白,、誘導(dǎo)免疫應(yīng)答、補(bǔ)充機(jī)體蛋白、調(diào)節(jié)免疫等作用,，從而預(yù)防或治療疾病,。人類90%以上的疾病與蛋白質(zhì)相關(guān)，基于mRNA特性,，mRNA技術(shù)在預(yù)防與治療疾病方面前景廣闊,。

Fig1 mRNA 免疫

泰克生物能夠為客戶提供多種抗原（包括但不限于PTM蛋白、細(xì)胞內(nèi)蛋白,、分泌蛋白）的mRNA免疫抗體制備服務(wù),，此外，泰克生物擁有包括從基因合成與修飾,、AAV載體構(gòu)建,、動物免疫、雜交瘤細(xì)胞的融合與篩選,、抗體生產(chǎn)等一站式技術(shù)服務(wù),，并且有配套的抗原抗體結(jié)合分析、抗原抗體BLI親和力測定,、抗體細(xì)胞系驗證,、等許多下游配套服務(wù)，為客戶的抗體藥研發(fā)與生產(chǎn)提供有力的支撐,。

█ mRNA的免疫原性

純化的mRNA僅包含單鏈RNA （single-stranded RNA, ssRNA）分子,，通過遞送系統(tǒng)包裹并以內(nèi)吞方式進(jìn)入核內(nèi)體，進(jìn)入核內(nèi)體后mRNA從遞送系統(tǒng)中釋放出來并被定位在膜上的Toll樣受體（Toll-like receptor, TLR)）7和TLR-8識別,，導(dǎo)致下游的髓樣分化標(biāo)記物88 （myeloid differentiation marker 88, MyD88）被激活,，引起I型干擾素（interferon, IFN）激活和炎癥因子的分泌。

█ mRNA疫苗制備過程

1. 制備IVT mRNA：抗原選擇,、線性DNA模板合成,、體外轉(zhuǎn)錄和mRNA純化。在對病原體的基因組進(jìn)行測序后選擇目標(biāo)抗原時,，將其插入質(zhì)粒 DNA 模板中,。生產(chǎn) DNA 模板應(yīng)包含抗原序列、5′和3′ UTR以及5′UTR上游的T7啟動子,。體外轉(zhuǎn)錄過程需要 DNA 模板,、修飾或未修飾的核苷和 T7 RNA 聚合酶。

2. mRNA進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)需要借助載體,，mRNA疫苗的遞送載體包括病毒載體和非病毒載體兩種：病毒載體以慢病毒,、腺病毒相關(guān)病毒和仙臺病毒等為主，病毒載體在進(jìn)行核酸遞送的同時也可能會引起免疫反應(yīng),，從而影響疫苗的效果,，非病毒載體主要包括脂質(zhì)體,、樹突狀細(xì)胞(dendritic cell, DC)、無機(jī)納米粒子,、陽離子細(xì)胞穿膜肽等,。

█ mRNA遞送系統(tǒng)

1.裸mRNA直接注射法：直接注射至組織中，通常使用蔗糖,、海藻糖溶液等緩沖液對mRNA進(jìn)行一定的稀釋處理,。優(yōu)點是成本低、方便快捷,、缺點是mRNA極易被RNA酶降解,，且難以穿過細(xì)胞膜。

2.體外DC負(fù)載：將mRNA離體加載或電穿孔入樹突狀細(xì)胞（Dendritic cells,，DCs）,，體外負(fù)載樹突狀細(xì)胞有利于抗原呈遞細(xì)胞的有效靶向。

3.陽離子納米乳：一種基于水包油的遞送方式,，由角鯊烯和表面活性劑如吐溫,、生育酚等組成，MF59和AS03是2種水包油乳劑佐劑,，應(yīng)用于2009年的流感疫苗研究中,。

4.陽離子肽和聚合物：

5.LNP：LNP含有4種組分：陽離子可電離脂質(zhì)、聚乙二醇（PEG）脂質(zhì),、磷脂,。陽離子可電離脂質(zhì)是LNP中最重要的一種組分，其電離系數(shù)與胞內(nèi)內(nèi)體基本保持一致,，不僅能夠促進(jìn)m RNA順利包裝至LNP中,，還在胞內(nèi)參與mRNA從內(nèi)體中釋放；PEG脂質(zhì)提供膠體穩(wěn)定性,，防止蛋白與納米粒結(jié)合,，從而減少網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對LNP的清除作用，增加體循環(huán)時長,。

█ mRNA藥物優(yōu)勢

（1）易在體外生產(chǎn)和純化,，除去蛋白藥物及病毒載體制備的復(fù)雜過程，同時可避免宿主蛋白及病毒源性污染,；

（2）IVT mRNA的生產(chǎn)工藝通用性強(qiáng),可以快速應(yīng)用于生產(chǎn)不同的目的蛋白,節(jié)省藥物研發(fā)時間,提高效率,；

（3）mRNA僅需進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)即可翻譯成蛋白質(zhì),，無需進(jìn)入細(xì)胞核,，因此不存在基因的插入和整合，提高藥物的安全性,；

（4）通過調(diào)節(jié)序列修飾和遞送載體可以改變其半衰期,；

（5）臨床試驗發(fā)現(xiàn),，雖然mRNA的蛋白質(zhì)表達(dá)是短暫性的，但其對于腫瘤的治療應(yīng)用有效,，且有利于藥代動力學(xué)和劑量的控制,。

█ mRNA免疫抗體制備服務(wù)流程

█ mRNA免疫抗體制備服務(wù)優(yōu)勢

? 無需重組蛋白或多肽，省時省力

? 無抗原污染風(fēng)險

? 生成具有高親和力和特異性的抗體

? 陽性的雜交瘤細(xì)胞株3-5株（小鼠單抗）

? 可提供抗體人源化服務(wù)并獲得的與原抗體具有相同的親和力的人源化抗體

? 可提供一系列抗體體外驗證服務(wù)

? 從基因合成與修飾,、AAV載體構(gòu)建,、動物免疫、雜交瘤細(xì)胞的融合與篩選,、抗體生產(chǎn)等一站式技術(shù)服務(wù)

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