T細(xì)胞活化和擴(kuò)增需要同時(shí)提供CD3/TCR信號(hào)和CD28共刺激信號(hào)。東嶺生物經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期優(yōu)化,，推出CD3/ CD28人T細(xì)胞活化/擴(kuò)增磁珠產(chǎn)品,，該磁珠通過(guò)在4.5μm粒徑磁珠表面偶聯(lián)抗CD3和抗CD28單克隆抗體，可在體外模擬體內(nèi)抗原提呈細(xì)胞對(duì)T細(xì)胞進(jìn)行高效的活化與擴(kuò)增,。

產(chǎn)品特點(diǎn)

與進(jìn)口和國(guó)產(chǎn)同類(lèi)產(chǎn)品相比,，磁珠活化效率更高，病毒感染效率更高,，擴(kuò)增倍數(shù)更多

其他本試劑盒未提供但需用的重要試劑和組分

培養(yǎng)基

胎牛血清

磷酸鹽緩沖液PBS

EDTA

使用說(shuō)明

(請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀使用說(shuō)明后再開(kāi)始相關(guān)實(shí)驗(yàn))

A. CD3/CD28 單抗偶聯(lián)磁珠的準(zhǔn)備

使用前,，需要洗去磁珠的保存液。

1.在使用前,，將磁珠懸浮液震蕩重懸30秒,，以獲得均一的懸浮液；

2.根據(jù)需要,，轉(zhuǎn)移適量磁珠懸浮液至Eppendorf管中,；

3.加入等體積的清洗液，或至少1ml磁珠清洗液,，通過(guò)震蕩5秒或反復(fù)吹打10次均勻混合,；

4.將管子置于磁力架3分鐘，在分離過(guò)程中,，不要將管子從磁力架上取下,；

5.用移液器將管中上清液移除（此時(shí)管置于磁力架上）,；

6.重復(fù)洗一次（步驟3-4），然后將磁珠重懸于緩沖液或培養(yǎng)基備用,；

B. 人T細(xì)胞的活化

1.按照標(biāo)準(zhǔn)程序獲得純化的2×106個(gè)T細(xì)胞,；

2.加入20μL本品磁珠，以獲得1：1的磁珠與細(xì)胞比例（不同細(xì)胞量參考培養(yǎng)體積建議表）,；

3.根據(jù)特定實(shí)驗(yàn)要求,，在37℃的CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4.收集活化的T細(xì)胞,，直接用于進(jìn)一步分析,。

5.對(duì)于流式細(xì)胞儀應(yīng)用，在染色前應(yīng)去除磁珠。將細(xì)胞懸液收集至Eppendorf管中,，置于磁力架1-2分鐘,，將含有細(xì)胞的上清液轉(zhuǎn)移至新Eppendorf 管中，棄磁珠,。

C. 人T細(xì)胞的擴(kuò)增

1.以1×106個(gè)純化的T細(xì)胞/ mL的濃度將細(xì)胞接種于合適的組織培養(yǎng)板或組織培養(yǎng)瓶中；

2.按照每1×106個(gè)純化的T細(xì)胞加入10 μL本品磁珠,，確保磁珠與細(xì)胞的比例為1:1,；

3.培養(yǎng)基中加入30 U/mL 重組人IL-2；

4.根據(jù)特定實(shí)驗(yàn)要求,，在37℃的CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

5.每日檢查細(xì)胞培養(yǎng)物，觀察細(xì)胞大小和形狀,；

6.*重懸后,，每?jī)商煊?jì)數(shù)細(xì)胞；

7.當(dāng)細(xì)胞密度超過(guò)2.5×106個(gè)細(xì)胞/ml或當(dāng)培養(yǎng)基變成黃色時(shí),，將細(xì)胞適當(dāng)擴(kuò)孔,。

注意事項(xiàng)

1.在使用前，必須將磁珠充分混勻重懸,；

2.切勿使用低于推薦劑量的磁珠,；

3.使用過(guò)程中避免產(chǎn)生氣泡；

4.在流式細(xì)胞儀分析之前,，應(yīng)去除磁珠以及與磁珠結(jié)合的細(xì)胞,。T細(xì)胞激活后的2-3天，一些細(xì)胞會(huì)牢固地與磁珠結(jié)合,，可通過(guò)移液*重懸磁珠/細(xì)胞懸液,，在磁力架上分離磁珠和細(xì)胞，收集含有T細(xì)胞的上清液,。

5.當(dāng)使用細(xì)胞進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)或基因表達(dá)等分子水平研究時(shí),，在去除磁珠之前需先裂解細(xì)胞。

附錄

表1. 磁珠：細(xì)胞=1:1時(shí)培養(yǎng)基及磁珠體積推薦表

數(shù)據(jù)展示

圖1：使用東嶺

圖2：使用東嶺

圖3：使用東嶺CD3/CD28人T細(xì)胞活化/ 擴(kuò)增磁珠活化人CD3+T細(xì)胞,，磁珠與細(xì)胞比例1:1,，活化24小時(shí)后感染GFP慢病毒，MOI=1.0（即病毒顆粒與T細(xì)胞數(shù)目比例為1:1），感染效率達(dá)~60%之多,。

圖4：使用東嶺CD3/CD28人T細(xì)胞活化/ 擴(kuò)增磁珠活化培養(yǎng)人CD3+T細(xì)胞,，磁珠與細(xì)胞比例1:1，10天內(nèi)擴(kuò)增達(dá)100倍以上,。