本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷,。

微生物ELISA試劑盒-微囊藻毒素LR（MC-LR）elisa檢測(cè)試劑盒使用說明書：

檢測(cè)原理：

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被微囊藻毒素LR（MC-LR）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并徹-底洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的微囊藻毒素LR（MC-LR）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度,。

樣品收集,、處理及保存方法：

1.  樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因?yàn)榀B氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2.  標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,。

3.  植物萃取液或其它相關(guān)樣本：請(qǐng)1000xg離心20分鐘，取上清即可檢測(cè),。

4.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品：

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

1. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL

2. 37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)：

1.  試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶全/部溶解后再使用,。

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存。

3.  濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白,；按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍,，最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間,、加液量及順序進(jìn)行溫育操作,。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

微囊藻毒素LR（MC-LR）elisa檢測(cè)試劑盒試劑盒組成：

注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0,、4,、8、16,、24,、48ng/L。

微生物ELISA試劑盒試劑的準(zhǔn)備：

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。

洗板方法：

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.  自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min,，洗板5次。

操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,。

3.  樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,，再加樣本稀/釋/液40μL；空白孔不加,。

4.  除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

1.  每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。

2.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值。

結(jié)果判斷：

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中,，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值,。

試劑盒性能：

1.  準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900,。

2.  靈敏度：低檢測(cè)濃度小于1.0ng/L,。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.  重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%,。

5.  貯藏：2-8℃,，避光防潮保存。

6.  有效期：6個(gè)月,。

免責(zé)聲明：

1.  試劑盒僅供研究使用,，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果,，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),，本公司概不負(fù)責(zé)。

2.  嚴(yán)格按照說明書操作,，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作,，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。