實驗外包:

1.基因組學：基因芯片,、SNP檢測,、DNA甲基化檢測、生物信息學分析

2.轉錄組學：microRNA芯片,、LncRNA芯片,、表達譜芯片、RNA-seq

3.蛋白質組學：2D-DIGE,、SILAC,、iTRAQ、TMT,、Label-free,、MRM

4.基因檢測：DNA/RNA提取,、RT-PCR,、Real-timePCR

5.蛋白質檢測：Western blot,、Co-ip  EMSA,、CHIP,、熒光、ELISA

6.病理檢測：HE染色,、特殊染色,、組織切片,、組化,、流式細胞分選

7.代謝組學：GC-MS,、LC-MS,、NMR

8.細胞及動物模型：原代細胞、細胞模型,、動物模型構建
產品屬性：
產品名稱：大腸桿菌(O139)PCR檢測試劑盒
英文名稱：

規(guī)格：50T

分類：PCR檢測試劑盒

儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融,。

公司產品僅用于科研運輸：低溫,、避光,，快遞免費送貨上門。
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PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中,，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix （2mM）

4 μl     引物1（10pM）

2 μl     引物2（10pM）

2 μl     Taq酶 （2U/μl）

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）

1 μl      加ddH2O至 50 μl

視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油,。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min,，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min,。

3：PCR試劑盒結束反應,，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油,，需用100μl進行抽提反應混合液,，以除去石蠟油,；否則,，直接取5-10μl電泳檢測,。

使用方法:
一,、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）,。由于標準品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7,，6，5,，4,，3，2,。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,，*用帶芯槍頭，下同）,。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL,，試劑盒提供),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用。
4. 換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用,。
5. 換槍頭,，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品,。放冰上待用,。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,，本產品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產品兼容,。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取,，多出的一個用作樣品制備陽性對照管,、另一個用作樣品制備陰性對照管,。
三,、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,，則標記 N+9 個 PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板）,，6 個用于標準曲線,。如果做定性分析，并且只做 1 次重復,，則標記 N+4 個 PCR 管,，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板）,，1 個用于PCR 陽性對照,。
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