特點優(yōu)勢：

   1.特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,，特異性均達到佳 。

   2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,，重現(xiàn)性為佳 ,。

   3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,，可實現(xiàn)對其的直接檢測,，無需繁瑣的增菌過程。

   4.   實用性：檢測范圍廣,，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌,，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時,。

   5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富,，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯,，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

   6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,，憑借公司擁有的豐富的菌種資源,，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果,。

提取步驟：

1.從負八十冰箱取出樣品,，放置于冰上緩慢解凍； （提前預冷離心機至4度）

2.待解凍后（紅色）,，加入200 μl氯仿（加入氯仿體積為Trizol體積的1/5）,，劇烈震蕩（乳白紅色），冰上靜置10 min,。 （氯仿為有機溶劑,，有效的使有機相和無機相迅速分離,。有機相中主要是酚和蛋白結(jié)合，從而使得蛋白和RNA脫離,，RNA進入水相,。）

3.放置于預冷離心機，離心（4度,，12000 rpm,，15 min），離心后可見明顯分三層（上層無色透明水相為RNA層,，中間很薄的乳白色為DNA層，下層為紅色為蛋白層）,。

4.小心緩慢吸取上清,，約400 μl（寧可少吸,，也不要多吸取）,，置于另一個新的1.5 ml RNase-free EP管中,，加入等體積的異丙醇,，上下顛倒混勻，常溫靜置放置15 min,。

5.離心（4度,，12000 rpm，15 min）,，可見白色沉淀（有時細胞較少看不到沉淀,，可放置負二十或負八十兩小時再繼續(xù)后面步驟）

6.棄上清，每管加入950 ul 75% 乙醇,，上下顛倒混勻（切記不要用槍吹打混勻,，這樣會造成RNA溶解）。

7.離心（4度,，12000 rpm,，10 min），可見底部明顯白色沉淀,。

8.離心后,，棄掉上清,，放入離心機再次瞬離，用10 μl 的移液器洗去殘留液體,， 開蓋晾干（約5 min）,。

9.每個樣品根據(jù)沉淀大小加入適量DEPC水（一般20~30 μl，有時看不到沉淀,，可加10 μl DEPC水溶解）,，吹打溶解RNA，十一樓酶標儀測濃度,，OD值（260/280=1.8-2.0）標記,，負八十保存。

備注：對于中性粒細胞提取RNA建議細胞數(shù)目大于2x106/樣品,；

備注：操作過程中佩戴口罩,。

PCR反應五要素：
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶,、dNTP,、模板和Mg2+
引物： 引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度,。理論上,，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增,。
設(shè)計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右,。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜,，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜,，G+C太少擴增效果不佳,，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列,。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補,，特別是3’端的互補,，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶,。
⑤引物3’端的堿基,，特別是 末及倒數(shù) 個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗,。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,，被擴增的靶序列 有適宜的酶切位點，這對酶切分析或分子克隆很有好處,。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性,。

注意事項:

1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。

2.各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

3.請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔di一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請再乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

5.底物請避光保存,。

6.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

7.所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

8.本試劑不同批號組分不得混用。

9.不能使用過期產(chǎn)品,。

10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準。