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制作動(dòng)物模型 細(xì)胞培養(yǎng) 分子生物學(xué)檢測(cè) 病理學(xué)形態(tài)檢測(cè) 蛋白質(zhì)技術(shù) 免疫學(xué)檢測(cè) 提供培訓(xùn)服務(wù)各種檢驗(yàn)儀器設(shè)備、玻璃儀器及器具,、一次性耗材等
子宮內(nèi)膜異位癥模型實(shí)驗(yàn)介紹:
常用動(dòng)物:大鼠,,小鼠,性成熟,,8-10周齡
適應(yīng)性飼養(yǎng)后,,用消毒棉拭子旋轉(zhuǎn)插入小鼠陰道內(nèi),并在陰道內(nèi)輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)幾下后取出,,涂于載玻片上,,用95%酒精固定30min后晾干。涂片進(jìn)行HE染色或瑞士染色,,觀察動(dòng)情周期,。連續(xù)觀察2周,每日定時(shí)進(jìn)行陰道涂片檢查,,觀察動(dòng)情周期,。選擇連續(xù)有2個(gè)或2個(gè)以上正常動(dòng)情周期(陰道涂片為大量無核角化細(xì)胞的大鼠),造模前一天每鼠肌注雌二醇0.1mg/(kg.d,,大鼠),,使動(dòng)物統(tǒng)一處于動(dòng)情期。
建模方法I:
大鼠:腹腔注射麻醉后,,將大鼠固定,,腹部剪毛,消毒,,并在無菌條件下開腹,。在尿道口上約1cm處做垂直正中縱切口長約2-3cm進(jìn)腹。大鼠子宮呈Y型,,分離左側(cè)子宮,,近端離左子宮角1cm處結(jié)扎,遠(yuǎn)端離卵巢2cm處結(jié)扎,,并結(jié)扎兩端間的子宮系膜血管,,切除長約1.5-2.0cm的子宮段,立即放入盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中,,修剪去子宮漿膜外的脂肪組織,,縱向切開子宮腔,剝?nèi){膜層及肌層,將子宮內(nèi)膜片剪成5mm×5mm大小,,移植到腹壁血管豐富處,,注意其內(nèi)膜面與皮下組織貼合。逐層縫合傷口,,待老鼠自然蘇醒后常規(guī)飼養(yǎng),。術(shù)后每天注射,共3天,。
建模4周后,,開腹檢查所有造模大鼠移植的子宮內(nèi)膜是否生長。若見移植物體積增大,,形成表面被覆結(jié)締組織并有血管形成,、內(nèi)有液體積聚的透明小囊泡,則證明造模成功,。
建模方法II:
小鼠:動(dòng)情期C57BL/6小鼠,,脫頸椎法處死,仰臥位固定,,腹部酒精消毒后,,鋪上無菌治療洞巾,戴無菌手套,,在恥骨聯(lián)合上方0.5cm處,,沿正中線剖開腹腔。找到Y(jié)形子宮,,小心分別牽出左,、右側(cè)子宮,細(xì)心分離雙側(cè)子宮系膜,。離斷宮角與卵巢,,在Y形子宮分叉分別剪斷左側(cè)及右側(cè)子宮,放入裝有10mL37℃生理鹽水的無菌彎盤中,,反復(fù)漂洗子宮表面的血跡,,進(jìn)一步分離剩余粘附的子宮系膜。將兩個(gè)子宮角分別放置于兩個(gè)無菌彎盤中,,將它們直接剪成大小約1mm3的大小均等的碎片,,并將它們懸浮于37℃生理鹽水中。將捐贈(zèng)鼠的子宮按1:2的比例接種于受鼠腹腔,,用0.3mL生理鹽水懸浮彎盤里的組織碎片,。
隨機(jī)取動(dòng)情期C57BL/6小鼠,取臍下0.5cm偏正中線0.5cm處的左下腹為進(jìn)針點(diǎn),,將溶有子宮組織碎片的0.3mL生理鹽水用20號(hào)針頭連同子宮組織快碎片注入接受鼠的腹腔,,后放置于鼠籠。直至第9天。隨機(jī)取動(dòng)物,,處死后,,取異位內(nèi)膜,進(jìn)行冰凍切片制備,,HE染色觀察異位內(nèi)膜病灶是否有典型的內(nèi)膜腺體及間質(zhì),,提示復(fù)制動(dòng)物模型是否成功。
分子實(shí)驗(yàn)平臺(tái):高效運(yùn)作了qRT-PCR,、Western blot,、雙向電泳技術(shù)、分子克隆與質(zhì)粒構(gòu)建,、流式細(xì)胞儀檢測(cè),、免疫共沉淀,、染色質(zhì)免疫共沉淀,、RNA免疫沉淀、凝膠電泳遷移實(shí)驗(yàn),、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定,、外泌體抽提及鑒定等實(shí)驗(yàn)。
基因組學(xué)平臺(tái):可以完成甲基化檢測(cè),、基因芯片分析,、高通量測(cè)序等實(shí)驗(yàn)。
蛋白組學(xué)平臺(tái):能實(shí)現(xiàn)LC-MS,、ITRAQ,、蛋白質(zhì)修飾分析等重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。
病理學(xué)平臺(tái):涉及免疫熒光染色,、免疫組織化學(xué)染色,、HE染色、特殊染色等實(shí)驗(yàn),。
臨床前CRO服務(wù):主要提供呼吸系統(tǒng),、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)性疾病的藥效學(xué)評(píng)價(jià)服務(wù),,包括靶點(diǎn)驗(yàn)證,、體內(nèi)外模型的構(gòu)建、藥物篩選,、藥物分析,、藥效性評(píng)價(jià)、藥代
動(dòng)力學(xué)和藥理學(xué)研究以及院內(nèi)制劑研發(fā)等,。
項(xiàng)目轉(zhuǎn)化服務(wù):助力客戶進(jìn)行方案設(shè)計(jì),、聯(lián)合課題申報(bào)、藥物項(xiàng)目引進(jìn)和孵化,解決客戶對(duì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái),、專業(yè)人和融資的需求,。
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