細(xì)胞周期檢測(cè)技術(shù)實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)共分以下4個(gè)主要步驟:

1.細(xì)胞鋪盤(pán)

HeLa S3細(xì)胞,，密度為80%左右分盤(pán),，使鋪盤(pán)密度在50%左右，為滿足流式細(xì)胞儀上機(jī)要求，細(xì)胞數(shù)目需大于1x10°/組,。

2.細(xì)胞同步化處理:

a)加入終濃度2mM的Thymidine同步化18h

b) 用溫育的PBS洗4次,，更換新鮮培養(yǎng)基，培養(yǎng)9h

c) 再加入2mM Thymidine再次同步化18h后

3.樣品收集 ;

a) 分別收取釋放2h(S期),，6h(G2/M期)和12h(G1期)細(xì)胞樣品

b) 每個(gè)樣品收取都使用預(yù)冷的PBS洗滌4次,，1000g離心5min，棄上清

c) 100uL PBS重懸沉淀,，吸取出細(xì)胞懸液于移液器中,，于移去細(xì)胞的管中加入900uL預(yù)冷的70%乙醇，漩渦振蕩器震蕩中滴

入細(xì)胞懸液,。

d)4℃固定一小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間,。

e)1500rmp，離心10min,，去固定液,。

f)細(xì)胞染色液配制:50xRNaseA母液:50xPI母液:PBS=20:20:960;RNaseA母液濃度1mg/mL，工作濃度20ug/mL;PI母液濃度2.5mg/mL,，工作濃度50ug/mL,。

g) 細(xì)胞37度染色1h。根據(jù)細(xì)胞量,，加入一定體積的細(xì)胞染色液(1~1.5mL)重懸,，使上機(jī)時(shí)細(xì)胞通過(guò)率為200~350Cell/s,染色液不可過(guò)多或過(guò)少，過(guò)多則細(xì)胞密度過(guò)低上機(jī)速度嚴(yán)重不足,，過(guò)少則導(dǎo)致細(xì)胞粘結(jié),。

h) 300目篩網(wǎng)過(guò)濾至流式管中。

4.上機(jī)檢測(cè);

流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè),，計(jì)數(shù)50000個(gè)細(xì)胞,。

5.同步化數(shù)據(jù)分析

細(xì)胞周期檢測(cè)技術(shù)

我們擁有專(zhuān)業(yè)的實(shí)驗(yàn)室、精良的實(shí)驗(yàn)設(shè)備和經(jīng)驗(yàn)豐富的科研技術(shù)人員,。技術(shù)團(tuán)隊(duì)包括研究員（博士后）2人,，助理研究員（博士）4人，核心研究員（碩士）15人,，主要致力于基因組學(xué),、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué),、代謝組學(xué),、生物化學(xué)、病理檢測(cè),、基因檢測(cè)等技術(shù)在科研中的應(yīng)用與推廣,。通過(guò)高度細(xì)分、較好的的服務(wù)平臺(tái)，為廣大客戶(hù)提供了完善的技術(shù)解決方案和服務(wù),。目前,，及，涉及臨床醫(yī)學(xué),、腫瘤生物學(xué),、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué),、分子生物學(xué)等生命科學(xué),、醫(yī)學(xué)等諸多領(lǐng)域。