免疫熒光染色服務(wù)一、制片

選無自發(fā)性熒光的石英玻片或普通優(yōu)質(zhì)玻片,，洗凈后浸泡于無水乙醇和乙.氧.基.乙.烷等量混合液中,。用時取出用綢布擦凈。將待檢樣品如組織塊剪成適當(dāng)大小印壓于玻片上,。也可采用冰凍切片或石蠟切片樣品,。

免疫熒光染色服務(wù)二、固定

除研究細(xì)胞表面抗原或不穩(wěn)定抗原可不固定外,，一般均應(yīng)固定,。

三、水洗

固定后以冷的0.01 Mol/L pH7.4PBS液浸泡沖洗,，最后以蒸餾水沖洗,，防止自發(fā)性熒光。

四,、染色

染色分直接染色法與間接染色法,。

1. 材料與試劑

(1)熒光抗體，稀釋至應(yīng)用濃度,。

(2)0.01 Mol/LpH7.4PBS液

(3)9份優(yōu)質(zhì)甘油加1份pH7.4PBS液即為甘油緩沖液,。甘油有減少非特異性熒光的作用。

(4)帶蓋方盤

2.直接染色法

(1)將固定好的玻片置于濕盤中,，滴加熒光抗體染色液,，以覆蓋為度,，加蓋，37℃感做30min~45min,

(2)PBS沖洗3次,，每次沖洗3 min,，即3x3沖洗。

(3)蒸餾水沖洗,。

(4)滴甘油緩沖液一滴,，封片，熒光顯微鏡檢查,。

3. 間接染色法

(1)檢查抗原:

①取固定標(biāo)本,，加已知的免疫血清，37℃孵育30 min,。

②以PBS液3x3沖洗,。

③再加熒光標(biāo)記的抗抗體，37℃孵育30 min,。

④PBS 3x3沖洗,。

⑤H2O沖洗，涼干,。

⑥加甘油緩沖液,，封片、鏡檢,。

(2)檢查抗體:

①免疫后動物的淋巴組織涂片,，自然干燥，甲醇固定,。

②滴加相應(yīng)抗原液(按1:100~1:500稀釋),，37℃孵育30 min。

③PBS液3x3沖洗,。

④加熒光抗體,，37℃孵育30 min。

⑤PBS液3x3沖洗,。

⑥水洗,，涼干。

⑦加甘油緩沖液,，封片,、鏡檢。