免疫熒光染色技術(shù)服務(wù)
- 公司名稱 伊萊博生物科技(上海)有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時(shí)間 2025/3/21 15:48:54
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一、制片
選無(wú)自發(fā)性熒光的石英玻片或普通優(yōu)質(zhì)玻片,,洗凈后浸泡于無(wú)水/醇和乙氧,基乙,烷等量混合液中,。用時(shí)取出用綢布擦凈。將待檢樣品如組織塊剪成適當(dāng)大小印壓于玻片上,。也可采用冰凍切片或石蠟切片樣品,。
二、固定
除研究細(xì)胞表面抗原或不穩(wěn)定抗原可不固定外,,一般均應(yīng)固定,。
三、水洗
固定后以冷的0.01 Mol/L pH7.4PBS液浸泡沖洗,,最后以蒸餾水沖洗,,防止自發(fā)性熒光。
四,、染色
染色分直接染色法與間接染色法,。
1. 材料與試劑
(1)熒光抗體,稀釋至應(yīng)用濃度,。
(2)0.01 Mol/LpH7.4PBS液
(3)9份優(yōu)質(zhì)甘油加1份pH7.4PBS液即為甘油緩沖液,。甘油有減少非特異性熒光的作用。
(4)帶蓋方盤
2. 直接染色法
(1)將固定好的玻片置于濕盤中,,滴加熒光抗體染色液,,以覆蓋為度,加蓋,,37℃感做30
min~45min,。
(2)PBS沖洗3次,,每次沖洗3 min,即3x3沖洗,。
(3)蒸餾水沖洗,。
(4)滴甘油緩沖液一滴,封片,,熒光顯微鏡檢查,。
3. 間接染色法
(1)檢查抗原:
①取固定標(biāo)本,加已知的免疫血清,,37℃孵育30 min,。
②以PBS液3x3沖洗。
③再加熒光標(biāo)記的抗抗體,,37℃℃孵育30 min,。
④PBS 3x3沖洗。
⑤H2O沖洗,,涼干,。
6加甘油緩沖液,封片,、鏡檢,。
(2)檢查抗體:
①免疫后動(dòng)物的淋巴組織涂片,自然干燥,,甲醇固定,
2)滴加相應(yīng)抗原液(按1:100~1:500稀釋),,37℃孵育30 min,。
③PBS液3x3沖洗。
④加熒光抗體,,37℃孵育30 min,。
⑤PBS液3x3沖洗。
⑥水洗,,涼干,。
⑦加甘油緩沖液,封片,、鏡檢,。